热启动Taq DNA聚合酶
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抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 100U
热启动Taq DNA聚合酶设计用于增强DNA扩增的特异性、敏感性和产量。使用该酶可在室温配制反应体系,使用非常方便。该酶在室温下没有活性,避免形成引物二聚体和非特异性延伸。从而增加DNA扩增的特异性。95℃加热4分钟可恢复酶活性。活化的酶具有与热启动Taq DNA聚合酶相同的功能:催化5’→3’方向合成DNA、无可检测的3’→5’校正外切酶活性、具有较低的5’→3’外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性,在PCR产物的3’-端多加1个腺嘌呤。活化前检测不到这些活性。此产品特点是: 高产量扩增复杂模板。95℃加热4分钟可激活酶活性。PCR特异性高-降低错配效应和减少引物二聚体的生成。增强的PCR敏感性。使用方便,室温配制PCR反应体系。扩增产物具有3’-dA突出末端。
酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。热启动TAQ DNA聚合酶传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出,表达量则常常超过大肠杆菌系统,如果实现高效分泌表达,则纯化成本非常低,具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。
热启动TAQ DNA聚合酶除了用于规模化生产重组蛋白之外,毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用,比如表达蛋白用于结构分析,信号传导途径研究,当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少,一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。
如果需要,完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索,从以往的战绩来看,毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了,热启动TAQ DNA聚合酶比例也很高,虽然仍存在风险。
1)原核诱导时间,从你的结果来看,诱导1-5小时变化不大,时间点影响较小,取3小时没有问题。很多情况下,温度对可溶性影响较大,不知道你30度诱导的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体,热启动TAQ DNA聚合酶倒是可以再降低一下诱导温度。此外,很多蛋白包含体复性后有活性,如果可溶性表达困难或表达量太低,仍可以考虑包含体复性策略。
2)酵母细胞的破壁可以采用机械法,也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨,主要用于中试和生产,但有的仪器也可以兼顾实验室规模,这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体,是一种外源基因高效转化的方法,热启动TAQ DNA聚合酶但用于破壁检测表达则成本太高,此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献,是小量裂截用于表达检测的,我没有直接作过,但我们实验室的研究生反映还可以。
PD077Buffer P2, 60ml
PD078Buffer P3, 100ml
PD079Buffer CPL, 100ml
PD080Buffer CXD, 100ml
PD081Buffer SFG1, 250ml
PD082Buffer SFG2, 60ml
PD083Buffer SFG3, 100ml
PD084Buffer FG1, 250ml
PD085Buffer FG2, 60ml
PD086Buffer FG3, 100ml
章 天净沙RNA纯化系列
RNA保存
3060-100 非冻型组织RNA保存液 100ml
3060-250 非冻型组织RNA保存液 250ml