数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 250U
本产品是Phusion DNA Polymerase基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和独特的双链DNA结合蛋白Sso7d融合而成，它具有下列特点：1. 极强的DNA持续合成能力，合成DNA能力分别是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。2. 快速，相比常用的DNA聚合酶，合成时间大大缩短，延伸速率为15-30s/kb。3. 可以短时间内高效、高保真扩增长片段DNA，*长可以扩增20Kb。3. 具有5’-3’和3’-5’核酸外切酶活性，是目前保真度的热稳定性聚合酶，保真性是Taq DNA聚合酶的50倍, Pfu DNA聚合酶的6倍。4. Phusion DNA聚合酶扩增的PCR产物为钝端双链DNA，不能直接用于AT克隆。

酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。PHUSION DNA聚合酶传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出，表达量则常常超过大肠杆菌系统，如果实现高效分泌表达，则纯化成本非常低，具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。

PHUSION DNA聚合酶除了用于规模化生产重组蛋白之外，毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用，比如表达蛋白用于结构分析，信号传导途径研究，当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少，一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。

如果需要，完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索，从以往的战绩来看，毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了，PHUSION DNA聚合酶比例也很高，虽然仍存在风险。

1）原核诱导时间，从你的结果来看，诱导1-5小时变化不大，时间点影响较小，取3小时没有问题。很多情况下，温度对可溶性影响较大，不知道你30度诱导的可溶性如何？如果蛋白主要是可溶性的，那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体，PHUSION DNA聚合酶倒是可以再降低一下诱导温度。此外，很多蛋白包含体复性后有活性，如果可溶性表达困难或表达量太低，仍可以考虑包含体复性策略。

2）酵母细胞的破壁可以采用机械法，也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨，主要用于中试和生产，但有的仪器也可以兼顾实验室规模，这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体，是一种外源基因高效转化的方法，PHUSION DNA聚合酶但用于破壁检测表达则成本太高，此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献，是小量裂截用于表达检测的，我没有直接作过，但我们实验室的研究生反映还可以。

 80905-5 大提柱式细菌RNAout 5次

90704-50 土壤RNAout 50次

90705-50 柱式土壤RNAout 50次

3073-50 一管式病毒RNAout 50次

3073-200 一管式病毒RNAout 200次

71001-50 柱式病毒RNAout 50次

80922-1 96孔板病毒RNAout 1次

80922-5 96孔板病毒RNAout 5次

81220-50 柱式昆虫RNAout 50次

miRNA提取

90203-50 沉淀法miRNA分离试剂盒 50次

70501-30 一站式沉淀法miRNAout 50次

70501-100 一站式沉淀法miRNAout 100次

80104-50 一站式柱式miRNAout 50次