胰蛋白酶，质谱级

 数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 100µg
胰蛋白酶(Trypsin) 是丝氨酸蛋白酶，可特异性地切开赖氨酸和精氨酸残基的羧基端。天然胰蛋白酶易于自我水解，产生假胰蛋白酶，后者特异性较广，含有胰凝乳蛋白酶样活性。存在于胰蛋白酶制剂中的这些自我水解产物能产生多余的肽片段，从而干扰质谱检测到的片段的数据分析。本产品为质谱级胰蛋白酶，其中的赖氨酸残基已经过还原甲基化修饰，成为活性高且稳定的分子，抗拒自我水解的性能特别强。纯化的胰蛋白酶的特异性又由于TPCK 处理使胰凝乳蛋白酶失活而进一步提高，能够保障进行胶内消化和质谱分析。

1．感受态的制备

（1）胰蛋白酶，质谱级接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。

（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。

（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。

（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。

（5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。

2．重组DNA的转化

（1）将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记：

（2）冰浴30min至1h。中间摇动3次，以防受体菌沉底。

（3）42℃90s。

（4）37℃水浴5min。

（5）胰蛋白酶，质谱级加入无相应抗生素的Lb 200μl，混匀后，37℃水浴30～60min。

（6）分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布，室温下干燥，然后倒置于37℃温箱中培养过夜。 

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。

胰蛋白酶，质谱级载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。

转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。

感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

转导:指以噬菌体为载体，胰蛋白酶，质谱级在细菌之间转移DNA 的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。

转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

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