T4 RNA连接酶(T4 RNA Ligase)
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检测试剂盒
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抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
细胞培养基
生化试剂
标准品/对照品
详细内容
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 1000U
本酶催化ATP降解为AMP和焦磷酸的反应,释放的能量能使寡核苷酸的5’-P末端和3’-OH末端结合,也能催化分子内连接的环化反应以及分子间的连接反应。*小底物为NpNpNOH(3’-OH Oligomer、受体)、pNp(5’、3’-DP monomer、供体)。连接效率受供体和受体各自的碱基影响很大。与RNA相比DNA连接的效率较低。本产品主要用途: 单链RNA及单链DNA的3’-OH末端的标记。 单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。 合成全长cDNA。
1.感受态的制备
(1)T4 RNA连接酶(T4 RNA LIGASE)接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)T4 RNA连接酶(T4 RNA LIGASE)加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
T4 RNA连接酶(T4 RNA LIGASE)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,T4 RNA连接酶(T4 RNA LIGASE)在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
GP10003-2GenPrep? Solid Tissue DNA Extraction动物组织50
GP10004-1GenPrep? Hair and Nail DNA Extraction毛发,指甲100
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GP10005-1GenPrep gDNA Bacteria Kit细菌100
GP10005-2GenPrep gDNA Bacteria Kit细菌50
GP10006-1GenPrep gDNA Yeast and Fungi Kit霉菌100
GP1006-2GenPrep gDNA Yeast and Fungi Kit霉菌50
GP10007-1GenPrep gDNA Plant Kit植物样本100
GP10007-2GenPrep gDNA Plant Kit植物样本50
--各种临床样本----
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