大肠杆菌DNA连接酶（E.COLI LIGASE）

 数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -20℃保存
规格： 1000U
本酶催化相邻DNA链的5′-P末端和3′-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需NAD作辅酶。本酶只能催化突出末端DNA之间的连接，但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下，也能连接平滑末端的DNA，但不能催化DNA的5′-P末端与RNA的3′-OH末端以及RNA之间的连接。此产品主要用途是： DN段和载体DNA的连接。 DN段和Linker或Adaptor DNA的连接。 cDNA的第二条链的合成。

1．感受态的制备

（1）大肠杆菌DNA连接酶（E.COLI LIGASE）接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。

（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。

（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。

（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。

（5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。

2．重组DNA的转化

（1）将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记：

（2）冰浴30min至1h。中间摇动3次，以防受体菌沉底。

（3）42℃90s。

（4）37℃水浴5min。

（5）大肠杆菌DNA连接酶（E.COLI LIGASE）加入无相应抗生素的Lb 200μl，混匀后，37℃水浴30～60min。

（6）分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布，室温下干燥，然后倒置于37℃温箱中培养过夜。 

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。

大肠杆菌DNA连接酶（E.COLI LIGASE）载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。

转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。

感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

转导:指以噬菌体为载体，大肠杆菌DNA连接酶（E.COLI LIGASE）在细菌之间转移DNA 的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。

转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

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