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大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)ELISA试剂盒
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详细内容
货号: | YH1591 |
样本: | 细胞上清液,血浆,组织均浆,血清等 |
标记物: | HRP/生物素 |
适应物种: | 大鼠 |
应用: | 科研研究用 |
检测方法: | ELISA |
检测限: | 详看说明书 |
供应商: | 上海依赫生物 |
数量: | 888 |
规格: | 48T/96T |
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用 ? 途: 用于小鼠血清、血浆及相关液体样本中5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)的测定。
检测原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样中小鼠5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)的水平。向预先包被了小鼠5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)单克隆抗体的酶标孔中加入5-羟色胺1A型受体(5-HT1A),温育;温育后,加入生物素标记的5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与样中小鼠5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)的浓度呈正相关。试剂盒组成?
名 ?称96孔配置12孔×8条48孔配置12孔×4条
备 ?注 1标准(50ng/ml)0.5ml0.5ml稀释即用型?
2 ?酶标包被板1块1块已包被即用型?
3标准稀释液3ml3ml即用型?
4链霉亲和素-HRP6ml3ml即用型?
530x倍浓缩洗涤液20ml20ml蒸馏水稀释?
6生物素标记的抗5-羟色胺1A型受体(5-HT1A) 抗体2ml2ml即用型?
7显色剂A液6ml3ml即用型?
8显色剂B液6ml3ml即用型?
9终止液6ml3ml即用型
10说明书1份1份即用型
11封板膜2张2张不可反复使用
12密封袋1个1个即用型
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片,570nm或630nm校正波长滤光片) 。
2. 洗板机(可调注液量,保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出)。
3. 超净工作台,生物安全柜,通风柜。
4. 高精度单道加液器(量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器(8道或12道,量程为50-300μl).
6. 37℃恒温箱。
7. 低温离心机。
8. 电冰箱(4℃,-20℃,-86℃).
9. ?漩涡混合仪,低频振荡器等注意事项1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。
5. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
6. ? 所有样,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。
7. ?各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
8. ?每次试验测定的同时做标准曲线,。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准孔高浓度的OD值),请先用样稀释液稀释定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n)。
9. ?配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,好使用微量振荡器(使用低频率),如无微量振荡器,可在反应手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆动作,使加入孔中的反应液混匀。
10. ?实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用充分预热。
11. ?手工洗板应注意:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 样本要求
1.不能检测含NaN3的样,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能上进行试验,可将标本放于-20℃保存或根据存放,时间做相应温度调整,但应避免反复冻融,(由于样本种类过多,每个单位处理方式不样,本说明书不做详细介绍)。?
操作程序1. 标准的稀释:(本试剂系统提供原倍标准支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释)按下表格执行:
?25ng/ml(5号标准)120μl的原倍标准加入120μl的标准稀释液 12.5ng/ml(4号标准)120μl的5号标准加入120μl的标准稀释液 ? 6.25ng/ml(3号标准)120μl的4号标准加入120μl的标准稀释液 ?3.12ng/ml(2号标准)120μl的3号标准加入120μl的标准稀释液 ?1.56ng/ml(1号标准)120μl的2号标准加入120μl的标准稀释液
2. 根据待测样数量加上标准的数量决定所需的板条数。每个标准和空白孔建议做复孔。每个样根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样:1)空白孔:(空白对照孔不加样,生物素标记的抗5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同 ;2)标准孔:加入标准50μl,链霉亲和素-HRP50μl(标准中已事先整合好生物素标记抗体,故在操作时不加,只加链霉素-HRP);3)样本反应孔:加入样本40μl,然后各加入抗5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)抗体10μl、链霉亲和素-HRP(空白孔除外)50μl。盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育60分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。 结果判断1. ?每个标准和标本的OD值应减去零孔的OD值。(若不减零孔值,标准曲线的零孔应相交于Y轴) 2.根据标准的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样的OD值在回归方程上计算出对应的样浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。3.手工绘制标准曲线。以标准浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 操作总结 准备试剂,样和标准 ? ? ? ? ?加入准备好的样和标准,生物素标记二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟。 ?洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟 ? ? 加入TMB终止液 ?10分钟内酶标仪测OD值 ? ?计算待测样本因子含量试剂盒性能1. 准确性:标准线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9200。2. 灵敏度:小可检测浓度达,0.105ng/ml。3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。5 .回收率:70-110%.6.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。7. 有效期:6个月8. 检测范围: 48ng/ml -0.39ng/ml