试剂盒描述

1.金刚烷胺酶联免疫法测试盒利用竞争性酶联允疫反应原理，对组织（牛肉 、鸡肉和猪肉）和其他样品中金刚烷胺的残留进行定量检测。金刚烷胺曾被美国食品药品监督管理局批准用作抗病毒药物和抗震颤麻痹药使用。它是1-金刚胺或1-氨基金刚烷的有机化合物，意味着它的结构组成是一个金刚烷主链和四个次甲基位置中有一个取代氨基。根据美因疾病预防控制中心，金刚烷胺在美国不再被推荐用作治疗流感，此外，它作为帕金森病药物的有效性是不确定的,2003的Cochrane。系统评价得出结论对它的疗效和安全性的支持与反对证据不足。2005年，报道称中国家禽农户已经使用金刚烷胺来保护禽类抗禽流惑，那时起，中因政府监管机构已经禁且它作为普药使用。

2.金刚烷胺酶联免疫法反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测金刚烷胺残留的方法，该试剂盒有以下特点：

3.高回收率（80%以上）， 快速（1小时之内完成提取过程）低成本提取。

4.高灵敏皮（0.5ppb）；低检测下（肉类0.25ppb) 。

5.检测过程只需妥不到2小时。

6.高重复性

2.试剂盒原理

金刚烷胺酶联免疫法反应测试盒基于竞争比色酶联反应原理，含有金刚烷胺的抗体已经包被于在微孔板上，药物分析时，样品同金刚烷胺－HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有金刚烷胺），会竞争结合板上包被的抗体，抑制金刚烷胺－HRP与包被抗体结合。加入底物后， 产物的颜色强弱与样品中金刚烷胺的浓反成反比。

3.试剂盒组成部分和储存

（1）试剂盒包括

已包被抗体的酶标板 …………………………………12 × 8孔

标准液（0,0.5,1.5,4.5,13.5,27PPb）…………6 × 1.8ML

回收用100ppb（可选）…………………………… 1 × 1.8ml

金刚烷胺酶标抗原……………………………………1.8ml

10乘以样品提取液……………………………………1 × 1.8ml

金刚烷胺纯化试剂……………………………………1 × 1.8ml

20乘以浓缩洗液………………………………………1 × 1.8ml

终止液…………………………………………………1 × 1.8ml

TMB底物………………………………………………1 × 1.8ml 

（2）试剂盒的保存

本试剂盒应当在2-8℃的温度下保存，有效期为一年。如果超过两周以上不使用试剂盒，请将金刚烷胺-HRP和金刚烷胺标准品放置-20℃冷冻保存。

（3）检测下限

（4）交叉反应

4.其他需要而本试剂盒未提供的设备或材料

酶标仪

恒温培养箱

移液器

漩涡振荡器

多道移液器

乙腈

二、检测方法

1试剂的准备

所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。

（1）1×工作洗液

按1:19的比例配置浓缩洗液和蒸馏水。举例：取10ml的20×浓缩先液加入到190ml双蒸馏水中，配置成200ml的1×工作洗液，按需要，可同比例放大或缩小。

（2）1×样品提取液

按1:9的比例配置样品提取液浓缩洗液和蒸馏水。举例：取1ml的10×样品提取液加入到9ml双蒸馏水中，配置成10ml的1×工作洗液，按需要，可同比例放大或缩小。

2样品的准备

2.1肉样/组织

（1）取适量样品用匀浆器匀浆

（2）称取3g的匀质样品加6ml乙腈和1g的金刚烷胺纯化试剂，以转速涡旋震荡3分钟。

（3）室温（22.5±2.5）℃离心4000g离心10分钟

（4）移取2ml乙腈上清液倒干净离心管中，在60-70℃下减压蒸馏或者60-700℃水浴氨气吹干。

（5）加入0.5ml的1×金刚烷胺样品提取液到干燥后样品中，以转速涡旋震荡2分钟。

（6）每孔取100μl上清液，进行样品测试。

稀释倍数：0.5

3酶联免疫法反应测试步骤

以下为计算分量的表格，用户可根据自己需要来确定需要配置多少试剂

（1）加入100μl的标准品或样品于所设定的孔中

（2）在每孔中加入50ul金刚烷胺-HRP酶标抗原，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（3）室温（22.5±2.5）℃避光孵育30分钟

（4）洗板3次，每次应加入250X洗液，*后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（5）加入100μl的底物；

（6）在室温室温（22.5±2.5）℃避光孵育15分钟，加入100μl的终止液终止反应，在450nm下读OD值

3计算结果

（1）分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值（%）=（标准或样品吸光度值/零标准吸光度值）X100

（2）以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）从标准曲线上读取质控和样品的浓度。