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●小鼠血清提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素 (地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
●小鼠血清提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
●小鼠血清提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
●小鼠血清对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等
避免小鼠血清产生沉淀物
1、解冻小鼠血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃,实验显示非常容易产生沉淀物。
2、解冻小鼠血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生
3、请勿将小鼠血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
4、小鼠血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
5、若必须做小鼠血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
应用域:该小鼠血清可应用于大多数免疫学实验,用作封闭液或空白对照等。
全血:
(1)小鼠血清的制备:获得的血液不能加抗凝剂,于离心管或可以离心的器皿中置于20-30°角的斜面上,静置或置37℃环境中促其凝固,待血液凝固后,将其离心(一般为3000rpm-6000rpm,离心 5~10min),得到的上清液即为血清,可小心将上清吸出(注意切勿吸出细胞成分),分装备用。
(2)血浆制备:在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂(抗凝剂:血液 = 1:9,将血液加到一定量后颠倒混匀,离心(离心条件同上)后所得的上清液即为血浆。初用者将上清移至另一清洁容器,吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸,切忌不能吸起细胞成分。
(3)富含血小板血浆制备:将获得的血液经800rpm,离心5min,其上清即为富含血小板血浆。
注意事项:注意采血时让血液滴下来,别碰试管壁. 溶血很可能是采血管不干净粘到毛发,收集时应尽量避免杂物如动物毛发、管壁挂水等,剧烈晃动收集管,离心速度过高易引起溶血。
冬天易出现果冻状,解决办法
1.取出的血室温放置(不要置于冰上)或放37度水浴箱一小时,等小鼠血清析出就可以离心了
2.离心转速3000-6000rpm,10min,室温
3.若还是有果冻,建议用移液枪头顺时针搅动血液后再次离心6000rpm,5min 效果较好。