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肝缺血(HI)大鼠模型
1.选取体重250g-300g大鼠,行术前12 h禁食,自由饮水。
2.15%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉,麻醉成功后将大鼠平躺在手术台上胶带固定四肢,将大鼠腹部至剑突术区剃毛 ,用 10%碘酒和75%乙醇术区消毒。
3.取腹正中切口1cm,打开腹腔,小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂(左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉)。
4. 用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉,使约70%的肝脏缺血,以防止发生严重肠系膜静脉淤血。0.5min后,与非阻断的右叶相比,肉眼可见阻断叶明显
变白,说明阻断成功,用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔,同时将大鼠放在37℃恒温加热垫上保温。
5. 完成持续缺血60min后,重新打开腹腔,迅速取出血管夹,恢复缺血肝血流,0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功,逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔,完成手术。待大鼠清醒后放回饲养室饲养,密切关注大鼠的状态及生存状况并做好记录。
6. 术后分别于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h处死大鼠,下腔静脉取血1ml,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。采用全自动生化分析仪检测血清中ALT(谷丙转氨酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)的水平。同时统一取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm留作病理标本或分生标本。
肝缺血(HI)大鼠模型 注意事项
1.分离肝门时用棉签分离,可避免对肝脏的损伤
2.术前禁食有利于手术进行
3.阻断血流要一次成功,否则会造成缺血预处理,减轻损伤程度
4.再灌后用棉签轻轻按压肝脏,有利于血流恢复
5.取材时镊子不要损伤肝脏。