人迟现抗原4(VLA4)elisa试剂盒操作方法

简介:

性状：盒装液体

贮藏条件：2-8℃低温保存

有效期：6个月

特异性：【试剂盒】可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。

检测种属：植物、人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。

适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

ELISA常用的方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。

ELISA试剂盒 样本要求:

1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

ELISA试剂盒注意事项

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范围为0.1-200ng/ml，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（0.1-200ng/ml范围内），乘以总稀释倍数即为样本*终浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

人迟现抗原4(VLA4)elisa试剂盒操作方法

ELISA试剂盒实验过程中需要用到的实验室器材：

1、标准规格酶标仪;

2、 高速离心机;

3、电热恒温培养箱;

4、干净的试管和Eppendof管;

5、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器;

6、蒸馏水，容量瓶等。

ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

抗体的酶标记方法及标记效果测定：良好的酶结合物取决于两个条件：即高效价的抗体和高活性的酶。抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要，因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5(g纯化抗体的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加硼氢化钠（NaBH4）溶液（ 5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即得到酶标抗体，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。

“ELISA试剂盒"特点:

准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

灵敏度：检测浓度小于10 pg/ml。

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

在使用之前，要将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 

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人迟现抗原4(VLA4)elisa试剂盒操作方法

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