南京牛血小板活化因子乙酰水解酶(PLA2G7)elisa试剂盒操作方法

牛ELISA试剂盒简介:

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃(频繁使用时)；-20℃(较长时间不用时)

特点：灵敏性高、特异性强、重复性好

种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

运输：快递运输，可根据客户要求，选择具体的运输方式

牛ELISA试剂盒产品优势：

一、高效、灵敏、特异的抗体；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等；

六、价格优惠，质量保证，限度的节省实验经费。

牛ELISA试剂盒实验流程:

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；

2. 加样（标准品及样本）100μL，37°C孵育1小时；

3. 吸弃，加检测溶液A100μL，37°C孵育1小时；

4. 洗板3次；

5. 加检测溶液B100μL，37°C孵育30分钟；

6. 洗板5次；

7. 加TMB底物90μL，37°C孵育15－25分钟；

8. 加终止液50μL，立即450nm读数。

标本的采集及保存:

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

酶联免疫的洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA?是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是*主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

牛ELISA试剂盒实验原理:

将转化生长因子β2 (TGFb2)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的转化生长因子β2 (TGFb2)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的转化生长因子β2 (TGFb2)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β2 (TGFb2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

南京牛血小板活化因子乙酰水解酶(PLA2G7)elisa试剂盒操作方法

牛ELISA试剂盒独具特点：

1. 灵敏，准确和一致的性能；

2. 用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证；

3. 在半天内可完成的现成、方便的检测。

对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白，使用双抗体夹心“人ELISA试剂盒"模式测定相当简便，现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式。

具体测定方法如下：

  1．首先以双抗体于碳酸盐缓冲液中4℃下包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。

  2．加入含待测物的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测抗原就会与固相上特异抗体反应而吸附于固相上。

  3．加入酶标记的双抗体之二，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成双抗体与特异抗原的夹心产物。

  4．加入酶底物，温育显色测定。

酶联免疫的加样，在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

牛ELISA试剂盒实验过程中需要用到的实验室器材：

1、标准规格酶标仪;

2、 高速离心机;

3、电热恒温培养箱;

4、干净的试管和Eppendof管;

5、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器;

6、蒸馏水，容量瓶等。

牛ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

南京牛血小板活化因子乙酰水解酶(PLA2G7)ELISA试剂盒操作方法

牛ELISA试剂盒怎样购买？

1、您确认好了产品后可直接和我们在线联系，或者是电话联系，确认您购买的产品。

2、可以把您需要购买的产品确认好以邮件的形式发给我们，这样您会在24小时内收到我们给您回复确认的邮件，或者是电话。

    邮寄（免运费）产品：现货一般当天定购，隔天由仓库统一出货；期货会在出货前由专人通知，仓库备货，依其产品性能，路途等选择进行包装邮寄，客户如有特别要求，可与销售人员提前沟通。

上海酶远ELISA试剂盒免费代测、送货上门

运输条件：低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

    您于我公司购买产品后有任何疑问，都可以打电话给我公司业务员，我们会为您安排解决。在为了节省您宝贵的时间，我们还提供免费代实验，只要你把样品邮寄给我们，我们会在5-7个工作日内完成，并且保证结果。如果您对我们的ELISA试剂盒感兴趣的话，您可通过QQ在线咨询、邮箱咨询、网站留言、电话拨打的方式与我们取得联系，我们将竭诚为您服务，祝您工作愉快！

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