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绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA试剂盒操作方法

点击次数:101发布时间:2016/8/24 0:05:31

绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA试剂盒操作方法

更新日期:2017/7/25 2:09:15

所 在 地:中国大陆

产品型号:

品牌名称:上海酶远

简单介绍:绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA试剂盒操作方法公司自主研发ELISA试剂盒,低价销售。公司原装ELISA试剂盒、进口ELISA试剂盒、国产ELISA试剂盒,免费代测,实验过程提供完整的技术指导,所有试剂盒均经过充分验证,确保有效性重复性。

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详细内容

绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)elisa试剂盒操作方法

ELISA检测试剂盒检测试剂盒”简介

 

种属:人 大鼠 小鼠 豚鼠 鸡 猪 山羊 牛等

规格:96T 48T

品牌:RD  TSZ                           

保存条件:2-8℃低温保存

保质期:六个月

ELISA洗涤一般可采用的方法有:

1.吸干孔内反应液;

2.将洗涤液注满板孔;

3.放置2min,略作摇动;

4.吸干孔内液,也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤的次数一般为34次,有时甚至需洗56次。

ELISA试剂盒产品优势:

一、高效、灵敏、特异的抗体;

二、稳定的重复性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;

五、可检测指标齐全:细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等;

六、价格优惠,质量保证,限度的节省实验经费。

ELISA试剂盒实验流程:

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;

2. 加样(标准品及样本)100μL37°C孵育1小时;

3. 吸弃,加检测溶液A100μL37°C孵育1小时;

4. 洗板3次;

5. 加检测溶液B100μL37°C孵育30分钟;

6. 洗板5次;

7. TMB底物90μL37°C孵育1525分钟;

8. 加终止液50μL,立即450nm读数。

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验,本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。

ELISA试剂盒实验原理:

将转化生长因子β2 (TGFb2)抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的转化生长因子β2 (TGFb2)与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的转化生长因子β2 (TGFb2)抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β2 (TGFb2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。

ELISA试剂盒供应商实验补充说明:

1. 试剂盒保存:部分试剂保存于-20℃,部分试剂保存于2-8℃,具体以标签上的标示为准。

2. 浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

3. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

4. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

5. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品,酶结合物或底物时,个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,

将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且,洗涤不充分将影响试验结果。

6. 所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

7. 有效期:6个月

8. 中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。

ELISA试剂盒标本的采集及保存:

1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则:

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。*后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml150 pg/ml75 pg/ml37.5 pg/ml18.5 pg/ml9 pg/ml4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则:

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)elisa试剂盒操作方法

ELISA试剂盒"特点:

准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900

灵敏度:检测浓度小于10 pg/ml

特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性:板内、板间变异系数均小于15%

在使用之前,要将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。根据来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。 

1)双抗体夹心法

2)双位点一步法

3)间接法测抗体

4)竞争法

5)捕获法测IgM抗体

6)应用亲和素和生物素

酶联免疫的加样,在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。

ELISA试剂盒实验过程中需要用到的实验室器材:

1、标准规格酶标仪;

2、 高速离心机;

3、电热恒温培养箱;

4、干净的试管和Eppendof;

5、系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器;

6、蒸馏水,容量瓶等。

ELISA试剂盒组成:

1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);

2)酶标记的抗原或抗体(结合物);

3)酶的底物;

4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);

5)结合物及标本的稀释液;

6)洗涤液;

7)酶反应终止液。

绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA试剂盒操作方法

ELISA试剂盒怎样购买?

1、您确认好了产品后可直接和我们在线联系,或者是电话联系,确认您购买的产品。

2、可以把您需要购买的产品确认好以邮件的形式发给我们,这样您会在24小时内收到我们给您回复确认的邮件,或者是电话。

    邮寄(免运费)产品:现货一般当天定购,隔天由仓库统一出货;期货会在出货前由专人通知,仓库备货,依其产品性能,路途等选择进行包装邮寄,客户如有特别要求,可与销售人员提前沟通。

我公司实验室现已拥有多个检测系统:

1ELISA双抗夹心法检测系统

2ELISA间接法检测系统

3ELISA竞争法检测系统

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