山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒操作方法

羊ELISA试剂盒简介：

上海酶远物为您提供各种种属、各种系列的ELISA检测试剂盒，仅限于实验室科学研究用，不适用于临床诊断。公司提供免费代测服务，详情请来电咨询或咨询在线人员。

可测种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马…

可测标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液

产品规格：96T/48T 中英文双版说明书 提供代测 含税含运费

经营品牌：R&D，TSZ

有 效 期：6个月

运输条件：低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法

保存温度：短期4℃/长期-20℃保存

应用范围：科研用检测试剂

羊ELISA试剂盒产品优势：

一、高效、灵敏、特异的抗体；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等；

六、价格优惠，质量保证，限度的节省实验经费。

羊ELISA试剂盒标本的采集及保存:

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

羊LISA试剂盒实验流程:

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；

2. 加样（标准品及样本）100μL，37°C孵育1小时；

3. 吸弃，加检测溶液A100μL，37°C孵育1小时；

4. 洗板3次；

5. 加检测溶液B100μL，37°C孵育30分钟；

6. 洗板5次；

7. 加TMB底物90μL，37°C孵育15－25分钟；

8. 加终止液50μL，立即450nm读数。

根据ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)，即我们通常所指的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)（微量板ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒),称为斑点ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)（Dot-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)）;再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)，称为布ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)（C－ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)）。在微量板ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)中，又根据其性质不同分为间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、双夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、竞争ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)及抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)。

羊ELISA试剂盒实验原理:

将转化生长因子β2 (TGFb2)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的转化生长因子β2 (TGFb2)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的转化生长因子β2 (TGFb2)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β2 (TGFb2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

羊ELISA试剂盒实验过程中需要用到的实验室器材：

1、标准规格酶标仪;

2、 高速离心机;

3、电热恒温培养箱;

4、干净的试管和Eppendof管;

5、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器;

6、蒸馏水，容量瓶等。

羊ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒操作方法

羊ELISA试剂盒独具特点：

1. 灵敏，准确和一致的性能；

2. 用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证；

3. 在半天内可完成的现成、方便的检测。

对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白，使用双抗体夹心“人ELISA试剂盒"模式测定相当简便，现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式。

具体测定方法如下：

  1．首先以双抗体于碳酸盐缓冲液中4℃下包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。

  2．加入含待测物的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测抗原就会与固相上特异抗体反应而吸附于固相上。

  3．加入酶标记的双抗体之二，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成双抗体与特异抗原的夹心产物。

  4．加入酶底物，温育显色测定。

酶联免疫方法标本的采取和保存，可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。

山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒操作方法

羊ELISA试剂盒怎样购买？

1、您确认好了产品后可直接和我们在线联系，或者是电话联系，确认您购买的产品。

2、可以把您需要购买的产品确认好以邮件的形式发给我们，这样您会在24小时内收到我们给您回复确认的邮件，或者是电话。

    邮寄（免运费）产品：现货一般当天定购，隔天由仓库统一出货；期货会在出货前由专人通知，仓库备货，依其产品性能，路途等选择进行包装邮寄，客户如有特别要求，可与销售人员提前沟通。

上海酶远羊ELISA试剂盒免费代测、送货上门

运输条件：低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

    您于我公司购买产品后有任何疑问，都可以打电话给我公司业务员，我们会为您安排解决。在为了节省您宝贵的时间，我们还提供免费代实验，只要你把样品邮寄给我们，我们会在5-7个工作日内完成，并且保证结果。如果您对我们的ELISA试剂盒感兴趣的话，您可通过QQ在线咨询、邮箱咨询、网站留言、电话拨打的方式与我们取得联系，我们将竭诚为您服务，祝您工作愉快！

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