仓鼠核因子κB(NF-κB)elisa试剂盒操作方法

“仓鼠ELISA检测试剂盒检测试剂盒”简介

种属：人 大鼠 小鼠 豚鼠 鸡 猪 山羊 牛等

规格：96Ｔ 48T

品牌：ＲＤ  TSZ                           

保存条件：2-8℃低温保存

保质期：六个月

仓鼠ELISA洗涤一般可采用的方法有：

1.吸干孔内反应液；

2.将洗涤液注满板孔；

3.放置2min，略作摇动；

4.吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤的次数一般为3～4次，有时甚至需洗5～6次。

仓鼠ELISA试剂盒产品优势：

一、高效、灵敏、特异的抗体；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等；

六、价格优惠，质量保证，限度的节省实验经费。

仓鼠ELISA试剂盒实验流程:

1. 实验前标准品、试剂及样本的准猫

孵育1小时；

3. 吸弃，加检测溶液A100μL，37°C孵育1小时；

4. 洗板3次；

5. 加检测溶液B100μL，37°C孵育30分钟；

6. 洗板5次；

7. 加TMB底物90μL，37°C孵育15－25分钟；

8. 加终止液50μL，立即450nm读数。

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，*后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

仓鼠ELISA试剂盒实验原理:

将转化生长因子β2 (TGFb2)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的转化生长因子β2 (TGFb2)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的转化生长因子β2 (TGFb2)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β2 (TGFb2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

仓鼠ELISA试剂盒供应商实验补充说明：

1. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。

2. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

4. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

5. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，

将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。

6. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

7. 有效期：6个月

8. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

仓鼠ELISA试剂盒标本的采集及保存:

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

仓鼠核因子κB(NF-κB)elisa试剂盒操作方法

“仓鼠ELISA试剂盒"特点:

准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

灵敏度：检测浓度小于10 pg/ml。

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

在使用之前，要将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 

1)双抗体夹心法

2)双位点一步法

3)间接法测抗体

4)竞争法

5)捕获法测IgM抗体

6)应用亲和素和生物素

酶联免疫的洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA?是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是*主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

仓鼠ELISA试剂盒实验过程中需要用到的实验室器材：

1、标准规格酶标仪;

2、 高速离心机;

3、电热恒温培养箱;

4、干净的试管和Eppendof管;

5、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器;

6、蒸馏水，容量瓶等。

仓鼠ELISA试剂盒组成：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。

仓鼠核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒操作方法

仓鼠ELISA试剂盒怎样购买？

1、您确认好了产品后可直接和我们在线联系，或者是电话联系，确认您购买的产品。

2、可以把您需要购买的产品确认好以邮件的形式发给我们，这样您会在24小时内收到我们给您回复确认的邮件，或者是电话。

    邮寄（免运费）产品：现货一般当天定购，隔天由仓库统一出货；期货会在出货前由专人通知，仓库备货，依其产品性能，路途等选择进行包装邮寄，客户如有特别要求，可与销售人员提前沟通。

我公司实验室现已拥有多个检测系统：

1．ELISA双抗夹心法检测系统

2．ELISA间接法检测系统

3．ELISA竞争法检测系统

4．ELISA捕获包被法检测系统

5．ABS-ELISA检测系统

仓鼠肿瘤坏死因子
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仓鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)ELISA试剂盒
仓鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒
仓鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒
仓鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒
仓鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒
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仓鼠极低密度脂蛋白(VLDL)ELISA试剂盒
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仓鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒
仓鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒
仓鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒
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仓鼠白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒
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仓鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒
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