长沙隐性孔雀石绿(Malachitegreen)ELISA检测试剂盒操作方法

药物残留类ELISA试剂盒简介：

【产品名称】：人ELISA试剂盒48T/96T

【产品品牌】：R&D TSZ

【保存温度】：短期4℃/长期-20℃保存

【产品用途】：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。

【洗板方法】：固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。

药物残留类ELISA试剂盒操作步骤：

1，试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

2，实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3，不用的其它试剂应包装好或盖好。

4，使用一次性的吸头以免交叉污染，避免使用带金属部分的加样器。

5，使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6，洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

8，严格按照说明书的操作方法进行操作。说明书以英文说明书为主。

本公司专业供应各大品牌Elisa试剂盒，其质量被全国各大院校科研机构认可，并指定为Elisa试剂盒长期供应商，作为战略合作伙伴。欢迎来电咨询订购！

药物残留类ELISA试剂盒实验原理:

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。

2.标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent)：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)

7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)

8.底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

药物残留类ELISA试剂盒需要而未提供的试剂和器材:

1.标准规格酶标仪

2.高速离心机

3.电热恒温培养箱

4.干净的试管和Eppendof管

5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6.蒸馏水，容量瓶等

长沙隐性孔雀石绿(Malachitegreen)ELISA检测试剂盒操作方法

药物残留类ELISA试剂盒标本的采集及保存:

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

酶联免疫的加样，在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

药物残留类ELISA试剂盒操作注意事项：

1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用8.手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

9.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

10.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

上海酶远免责声明：

1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

上海酶远独家辨别优劣“人ELISA试剂盒价格"的检测方法告诉您：

 1. 选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。

 2. 可采用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本加入，看检测的准确性。

 3. 对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的*小浓度稀释，可测出灵敏度，建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。

 4. 如果有相同指标的进口试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别加入各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，准确性。如其中一种是知名的，比较可靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。

长沙隐性孔雀石绿(Malachitegreen)ELISA检测试剂盒操作方法

辨别“药物残留类ELISA试剂盒"优劣的方法：

 1. 选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。

 2. 可采用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本加入，看检测的准确性。  

 3. 对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的*小浓度稀释，可测出灵敏度，建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。

 4. 如果有相同指标的进口试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别加入各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，准确性。如其中一种是知名的，比较可靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的准确程度。

辣根过氧化物酶（HRP） 过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的*适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的吸收光谱分别为275nm和403nm。

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