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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA检测试剂盒

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上传时间:2017/4/7 9:12:17

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上 传 者:上海酶远生物科技有限公司

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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA检测试剂盒
 参数规格:

检测范围:欢迎QQ或电话索取原版说明书.

产品规格:96T/48T。

主要成分:酶标板,试剂,标准品等

经营种类:进口分装和原装、国产

性状:盒装液体

试剂盒保存:2-8℃低温保存。

标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

ELISA常用的方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。

预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。

运输方面:现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货。

免费代测,从标本收集、保存、预试验、实验、数据分析等全实验过程提供完整的技术指导。

服务承诺:工作规格:48T/96T(仅用于科研,不得用于医学诊断)

保存:2-8℃,避光保存

有效期 :6个月

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA检测试剂盒
方法类型和操作步骤 :

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。   

(一)双抗体夹心法 

双抗体夹心法是检测抗原*常用的方法,操作步骤如下:  

(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。 

(2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

(3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

(4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 

(二)双位点一步法 

在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步(图15-5)。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法测定中,应注意钩状效应(hookeffect),类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

(三)间接法测抗体

间接法是检测抗体*常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下

(1)将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。

(2)加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。

(3)加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人IgG抗体。

(4)加底物显色:颜色深度代表标本中受检抗体的量。

本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

(四)竞争法

竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下:

(1)将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。

(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达*充分的量。洗涤。   

(3)加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原*多,故颜色*深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。

(五)捕获法测IgM抗体 

血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法,先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下:

(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上,形成固相抗人IgM。洗涤。

(2)加入稀释的血清标本:保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

(3)加入特异性抗原试剂:它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA检测试剂盒
注意事项:

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请*后乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

标本要求:

1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

订购说明:

1. 明确检测何种蛋白;

2. 明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性;

3. 寻找检测这些物种蛋白的试剂盒;

4. 咨询上海酶远使用的抗体类型;

5. 做出自己的判断该买哪个试剂盒。

 

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