HEPENGBIO冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒

产品说明书

主要用途

HEPENGBIO冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测冰冻组织内活性氧族的存在状况的技术方法。适宜于冰冻动物组织的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hyｄroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。 

产品内容

HEPENGBIO清理液（Reagent A）   50毫升

HEPENGBIO染色液（Reagent B）   100微升

HEPENGBIO稀释液（Reagent C）   50毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

培养箱：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，HEPENGBIO稀释液（Reagent C）置于室温预热。然后移出10微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入990微升HEPENGBIO稀释液（Reagent C），混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备5片待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片

2． 置于室温下，小心加上500微升预冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）

4． 小心加上200微升室温预热的HEPENGBIO染色工作液，铺满整个切片表面

5． 在37℃湿润培养箱里，孵育20分钟（注意：避免液体蒸发）

6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液，避免光照

7． 小心加上500微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）

9． 放上盖玻片或封片

10． 即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长490nm，散发波长530nm――荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事项

1． 本产品为50次操作

2． 建议使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片

3． 操作时，须戴手套

4． HEPENGBIO染色工作液避免光照

5． 孵育时，须避免光照

6． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析

7． 本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象

8． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司