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公司新闻
蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒-微量法-赫澎研选
点击次数：116发布时间：2020/12/15
货号：YX-W-B505规格：100 管/48 样
蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒说明书
微量法
正式测定管务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
测定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的的仪器和用
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰
试剂的组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存； 试剂五：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；
样测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 10 | 10 |
|
|
| 蒸馏水 |
| 45 | 45 | 55 |
| 试剂二 |
|
| 10 |
|
| 试剂 | 45 |
|
|
|
| 混匀，25℃准确水浴 10min | ||||
| 试剂三 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| 沸水浴中煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分散失），冷却 | ||||
| 试剂四 | 210 | 210 | 210 | 210 |
| 试剂五 | 60 | 60 | 60 | 60 |
混匀，沸水浴30min，冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下测定各管吸光
值。标准管和空白管只要做管。每个测定管需要设个对照管。
SPS 活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)）÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min/g 鲜重) = {C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)）÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。
