MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品简介：

Ø MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是种非常经典的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。

Ø 

MTT可以被线粒体内的些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan (图1A)。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解(图1B)。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度(图2)。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越    大，则吸光度越低。

图1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒实测效果图。A. HeLa细胞加入使用本试剂盒配制的MTT溶液，在细胞培养箱内孵育4小时，显微镜下可见大量结晶状的深紫色产物formazan生成。B. 不同数量HeLa细胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小时的效果图(上图)及深紫色产物formazan生成后加入Formazan溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果图(下图)。

图2. 本试剂盒检测不同数量HeLa细胞的效果图。不同的检测条件下，实际读数会因标准品的配制、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

Ø 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

Ø 本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

包装清单：

保存条件：

4ºC或-20ºC保存，MTT需避光保存，年有效；MTT配制成溶液后需-20ºC避光保存；Formazan溶解液也可以室温保存。

注意事项：

Ø 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，定要注意蒸发的问题。方面，由于96孔板周围圈容易蒸发，

可以采取弃用周围圈的办法，改加PBS，水或培养液；另方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

Ø MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用请室温放置或20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

Ø MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4ºC、冰浴等较低 温度情况下会凝固，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

Ø Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以室温或37ºC水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

Ø 加入Formazan溶解液后请适当轻轻混匀，但须注意避免产生泡沫。

Ø 本产品仅限于业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴次性手套操作。

使用说明：

1. MTT溶液的配制：用5ml MTT溶剂溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20ºC避光保存，

也可以根据需要适当分装后-20ºC避光保存。

2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目， 需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。

3. 每孔加入10微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。

4. 每孔加入100微升Formazan溶解液，适当混匀，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现formazan全部溶解。通常37ºC孵育3-4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长些，此时为加速溶解可以适当振摇数次。

在570nm测定吸光度(可参考图2)。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。