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公司新闻
苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒-说明书-紫外分光光度法
点击次数:252发布时间:2021/3/30
苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒说明书
注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-A604
规格:50T/48S
产品简介:
紫外分光光度法
PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶, 与些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm 处有大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。产品内容:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×3 瓶,4℃保存,临用每瓶加入 4mL 双蒸水充分溶解待用;现配现用。试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
操作步骤:
、粗酶液提取:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定操作表:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。
2、操作表
试剂名称 | 测定管(µL) | 对照管(µL) |
样本 | 20 |
|
试剂 | 780 | 800 |
试剂二 | 200 | 200 |
混匀,30℃准确水浴 30min | ||
试剂三 | 40 | 40 |
混匀,静置 10min 后,用对照管调零,290nm 处记录测定管吸光值 A(A=A 测定管-A 对照管)。
PAL 活性计算:
a. 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为个酶活力单位。
PAL(U/mg prot)=A×反应总体积(1040µL)÷样本体积(20µL)÷反应时间(30min)÷0.1 ÷蛋白浓度(mg/mL)=17.3×A ÷蛋白浓度(mg/mL)
b. 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 ml 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为个酶活力单位。
PAL(U/g 鲜重)=A×反应总体积(1040µL)÷﹝样本鲜重(g)×样本体积(20µL)÷V 样总(1mL)﹞
÷反应时间(30min)÷0.1 =17.3×A ÷样本鲜重(g)