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公司新闻
总果胶含量检测试剂盒说明书-赫澎生物研选
点击次数:194发布时间:2021/4/22
总果胶含量检测试剂盒说明书
注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-W-A517
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体 110mL×2 瓶,4℃保存。提取液二:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。试剂:浓硫酸 25mL,自备。
试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
微量法
标准品:粉剂×1 支,10mg 半乳糖醛酸,4℃保存。临用加入0.943mL 提取液二,配成50μmol/mL 的标准液
产品说明:
果胶是植物细胞壁主要组成成分之,分为水溶性果胶和不溶性果胶,不溶性果胶为原果胶(碱溶性果胶)。果胶是种天然高分子化合物,具有良好的胶凝化和乳化稳定作用,已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,与原有的可溶性果胶进步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在 530 nm 处有特征吸收峰。
仪器和试剂:">试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:
、总果胶的提取:
将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液体积(mL)为1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样品, 加入1mL 提取液),置于90℃恒温水浴锅中浸提 30min,取出冷却后于 5000g、25℃离心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL 提取液重复操作次,离心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二, 置于90℃恒温水浴锅中水解 1h,取出冷却后于 8000g、25℃离心15min,取上清液待测。
二、测定步骤:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 530nm,蒸馏水调零。
2、将50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表:
第 1 页 共 2 页
试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
样本(μL) | - | - | 25 | 25 |
标准品(μL) | - | 25 | - | - |
蒸馏水(μL) | 25 | - | - | - |
试剂(μL) | 200 | 200 | 200 | 200 |
混匀、90℃放置 10min,取出后冷却 | ||||
试剂二(μL) | - | - | 25 | - |
试剂三(μL) | 25 | 25 | - | 25 |
混匀,25℃静置30min 后吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中,测定530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和A 测定管。△A 标准=A 标准管-A 空白管,△A 测定=A 测定管-A 对照管。 |
三、总果胶含量的计算
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的△A 标准为y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b, 将△A 测定带入方程得到x(μmol/mL)
2、 总果胶含量的计算:
总果胶含量(μmol /g 鲜重)= x×V 提取液二÷W =x÷W
V 提取液二:加入提取液二的体积,1mL;W:样本鲜重,g。
注意事项:
1、浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热、冷却后再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2、若吸光值超过1,可将样本提取液二进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。