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公司新闻
土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书-微量法
点击次数：232发布时间：2021/4/23
货号：YX-W-B917 规格：100管/48样
土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容：
缓冲液：液体8mL×1 瓶，4℃保存。
试剂：液体8mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体4mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体10mL×1 瓶，4℃避光保存。
产品说明：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
需自备的仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸馏水。
操作步骤：
、样品处理
新鲜土样风干，过40 目筛。
二、测定操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 土样(g) | 0.02 |
|
| 甲苯（μL） | 10 |
|
| 混匀，25℃静置15min | ||
| 缓冲液（μL） | 120 | 40 |
| 试剂（μL） |
| 80 |
| 混匀，37℃震荡培养1h，8000rpm，4℃，离心10min，取上清100μL | ||
| 试剂二（μL） | 40 | 40 |
| 混匀，沸水浴7min | ||
| 试剂三（μL） | 40 | 40 |
| 试剂四（μL） | 100 | 100 |
| 混匀，37℃水浴30min，取200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A 对照管和A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管。 | ||
三、计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.3575x-0.0143，R2=0.9989
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（mg/d/g）=（ΔA +0.0143）÷2.3575×V 反总÷W÷T
= 15.264×（ΔA +0.0143）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d
b. 用96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=1.1788x-0.0143，R2=0.9989
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（mg/d /g）=（ΔA +0.0143）÷1.1788×V 反总÷W÷T
= 30.528×（ΔA +0.0143）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d
注意事项：
1． 试剂充分混匀后再使用。
2． 反应结束后立即进行比色。
3． 试剂四有定的毒性，请操作时做好防护措施。
