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公司新闻
总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书
点击次数：269发布时间：2021/6/3
总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：YX-C-B409
规格：50T/48S 产品简介：
可见分光光度法
总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2；后利用过氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与TC 含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、天平、低温台式离心机、玻璃比色皿、可调式移液枪、
EP 管、蒸馏水、异丙醇。产品内容：
提取液：异丙醇 50mL×1 瓶，自备，4℃保存；
工作液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，10mg胆固醇，4℃保存。临用加入517μL提取液，振荡溶解，即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液。
操作步骤：
一、样本处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 ，间隔 3 ，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接测定。二、测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表：(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)
第 1 页 共 2 页
|
| 测定管 | 标准管 | 空白管 |
| 样品（µL） | 100 | - | - |
| 标准溶液（μL） | - | 100 | - |
| 提取液（μL） | - | - | 100 |
| 工作液（µL） | 900 | 900 | 900 |
| 充分混匀，37℃静置 15min，反应完成后测定 500nm 处吸光值 A，分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A 标准管-A 空白管， 空白管只需测一次。 | |||
总胆固醇含量计算
一、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x（μmol/mL）
二、总胆固醇含量的计算：
1. 血清（浆）中 FC 含量计算：
TC 含量（μmol/dL）=x×100。
2. 组织中 FC 含量计算：
1. 按样本蛋白浓度计算
TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr。
2. 按样本鲜重计算
TC 含量（μmol/g 鲜重）=x×V 提取÷W= x÷W
3. 细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；V 提取：加入样本的提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500:500 万个细胞数量。
注意事项
当△A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
