IgG（1、2a、2b）类小鼠单克隆抗体纯化试剂盒使用说明书

C080203（50ML纯化量）

试剂原理：

本试剂盒利用不同蛋白需要的沉淀试剂和沉淀条件不同，通过大量实验分析验证而得到的一个与传统沉淀纯化相比有较大不同的精细的具有高活性、高产率、快速以及良好重复性的单克隆抗体的纯化方法。

试剂特点：

           本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体保持高活性和较高纯度。实验表明，本试剂盒可以得到90%以上纯度的抗体；并且由于配方考究，抗体在纯化过程中几乎没有损伤，完全保持应有的活性；实际应用好。

适用范围：

          本试剂盒适用于小鼠IgG类包含IgG1\IgG2a\IgG2b亚类的单克隆抗体腹水的纯化，不能用于IgG3、IgM和IgA类单克隆抗体腹水的纯化实验，如需要可选择本公司其它货号的纯化试剂，它能为您带来良好的结果。

试剂组成：

纯化步骤：

1、 从冰箱中取出试剂盒放置室温恢复温度30分，期间可将单克隆抗体腹水从冰箱中取出，室温复温15分钟，随后用自来水边冲边摇匀快速解冻。

2、 将化开的单克隆抗体腹水8000-12000RPM 室温 离心10分钟。

3、 先吸弃上面浮沫和油脂，然后将上清转出到另一个干净容器或离心管；按每1毫升单克隆抗体腹水加入纯化液A（加确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可） 1毫升（必须精确），室温避光倒转30分。

4、 8000RPM 室温离心10-20分钟，沉淀用纯化液B溶解到原单克隆抗体腹水1/2体积，再按此体积每1毫升加入纯化液C （加确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1毫升（（必须精确），室温避光倒转10分钟。

5、 8000RPM  室温离心10-20分钟，弃沉淀收集上清；每1毫升上清液加纯化液D（加确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）  1毫升（必须精确），室温避光倒转20分钟。

6、 8000RPM 室温离心10-20分钟，收集沉淀用纯化液B收集溶解沉淀到原单克隆抗体腹水体积的1/3。透析袋用纯水浸泡3-5分钟，然后用手揉捏数次，接纯水冲洗干净，抗体放入扎好。透析液用纯水溶解透析试剂到8L，将要透析的抗体袋子放入。抗体体积：透析液体积=1:100，4℃透析过夜。收集透析后抗体。

7、 以透析后抗体体积：纯化液E的体积=9：1的比例加入纯化液E摇匀（也就是9体积抗体加1体积纯化液E），静置5min后8000RPM  室温离心10分钟，弃沉淀收集上清即为纯化好的抗体。

8、 将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。抗体体积：透析液体积=1:50以上；4℃透析，中间换液三次，透析总时间不超过24小时。然后8000RPM 室温离心10分钟，收集上清测蛋白浓度并调控在5mg/ml左右后加10/万NaN3防腐并除菌过滤-20℃备用。

注意事项：

1、 溶血严重和腐败的腹水不得用于纯化。

2、 离心温度不要超过37℃。

3、 操作和量取试剂要细致精准,否则影响纯度。

4、 不搅拌透析每次静置透析时间不得低于4小时。

5、 如觉得透析太慢可以选择超滤管。

6、 透析试剂需要一次性配成8升或者配成十倍液（800ml),然后使用时稀释；不得称取或倒出部分试剂进行配制。