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公司新闻
葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒-说明书-可见分光光度法
点击次数:247发布时间:2021/7/8
葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒说明书
注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-A403
规格:50T/48S
产品内容:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 1mL×2 支,-20℃保存,融化后可分装保存。
产品说明:
可见分光光度法
GOD(EC 1.1.3.4)广泛存在于动物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生 H2O2, 是生物体中产生活性氧的代谢途径。
GOD 催化葡萄糖氧化产生 H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化 H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
试验中所需的仪器和设备:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤:
一、样品测定的准备
1、组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清, 置冰上待测。
2、血清(浆):直接检测。二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
2、GOD 工作液的配制:取 20mL 试剂一+3.5mL 试剂二混匀,调 pH 至 5.1(现配现用)。
3、加样表:
试剂名称(μL) | 测定管 |
GOD 工作液 | 900 |
试剂三 | 30 |
混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min | |
样本 | 100 |
样品测定将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温,然后将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中,加样本的同时开始计时;在 500 nm 波长下记录 20 时的初始吸光度 A1 及 1 分 20 时的吸光度 A2。计算ΔA=A2-A1。
三、GOD 活力单位的计算
1、动物组织 GOD 活力的计算
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T=1373×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/g 鲜重)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1373×ΔA÷W 2、血清(浆)GOD 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T=1373×ΔA
V 反总:反应总体积,1.03mL;V 样本:加入样本体积,0.1mL;V 提取,加入提取液体积, 1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;d:光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cm;T:反应时间,1min。
注意事项:
1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样,做正式试验之请做 1-2 支预实验,若 A2-A1>1,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液,使 A2-A1<1,以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。
2、好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
3、此试剂盒仅适用于动物组织和动物血清(浆)。