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公司新闻

葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒-说明书-可见分光光度法

点击次数:247发布时间:2021/7/8

 葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒说明书

注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号YX-C-A403

规格:50T/48S

产品内容:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃保存;

试剂三:液体 1mL×2 支,-20℃保存,融化后可分装保存。

产品说明:

 

 

可见分光光度法


GODEC 1.1.3.4广泛存在于动物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生 H2O2 是生物体中产生活性氧的代谢途径。

GOD 催化葡萄糖氧化产生 H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化 H2O2 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

操作步骤:

一、样品测定的准备

1、组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清, 置冰上待测。

2、血清(浆:直接检测。二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。

2GOD 工作液的配制:取 20mL 试剂一+3.5mL 试剂二混匀,调 pH 5.1(现配现用

3、加样表:

试剂名称(μL

测定管

GOD 工作液

900

试剂三

30

混匀,37℃(哺乳动物25℃(其它物种水浴 5min

样本

100

样品测定将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温,然后将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中,加样本的同时开始计时;在 500 nm 波长下记录 20 时的初始吸光度 A1 1 20 时的吸光度 A2。计算ΔA=A2-A1


三、GOD 活力单位的计算

1、动物组织 GOD 活力的计算

(1) 按蛋白浓度计算

单位的定义 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GODU/mg prot=ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T=1373×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GODU/g 鲜重)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1373×ΔA÷W 2、血清(浆)GOD 活力的计算

单位的定义 mL 血清(浆在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GODU/mL=ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T=1373×ΔA

V 反总:反应总体积,1.03mLV 样本:加入样本体积,0.1mLV 提取,加入提取液体积, 1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本鲜重,gd:光径,1cmε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cmT:反应时间,1min

注意事项:

1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样,做正式试验之请做 1-2 支预实验,若 A2-A1>1,则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液,使 A2-A1<1,以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。

2、好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。

3、此试剂盒仅适用于动物组织和动物血清(浆

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