细胞名称：小鼠逆转录病毒包装株；PT-67

英文简称：PT-67

背景资料：收到细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快和我们联系。如包装完好，取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在显微镜下观察细胞形态是否正常，细胞的贴壁情况以及细胞密度,然后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-640小时，以稳定细胞状态。

细胞来源：大部分来源ATCC、ECACC、DSMZ等国外细胞库，少数国内建系！

代次：P3

产品规格：T25

细胞数：1x10^6 cells

生长特性：贴壁生长

形态特征：

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

品质保证：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

培养条件：89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2

传代方法：建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

二、细胞培养常见问题分析及处理方法

问题1：培养液pH值变化太快

可能原因

（1）CO2张力不对

（2）培养瓶盖拧得太紧

（3）NaHCO3缓冲系统缓冲力不足

（4）培养液中盐浓度不正确

（5）细菌、酵母或真菌污染

建议解决方法

（1）按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。

（2）松开瓶盖1/4圈。

（3）改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。

（4）在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。

（5）丢弃培养物，或用抗生素除菌。

问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变

可能原因

（1）洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来

（2）冰冻保存培养液

建议解决方法

（1）用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。

（2）将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化

可能原因

细菌或真菌污染

建议解决方法

丢弃培养物，或用抗生素除菌。

问题4：培养细胞不贴壁

可能原因

（1）胰蛋白酶消化过度

（2）支原体污染

（3）培养瓶瓶底不干净

（4）培养液pH值过碱（NaHCO3分解）

（5）消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当

（6）细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）

（7）接种细胞起始浓度太低或太高

建议解决方法

（1）缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

（2）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

（3）注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶

（4）使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）

（5）重新配置消化液或培养液

（6）启用新的保种细胞

（7）调节*佳接种细胞浓度

三、部分相关细胞如下

人B淋巴细胞；NCI-BL1339 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
人淋巴瘤细胞（B细胞非霍奇金淋巴瘤）；REC-1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
人脑神经母细胞瘤细胞 DMEM:F12(1:1)+10%FBS
人胰腺癌细胞；Capan-2 McCoy＇s 5a +10%FBS
人脑瘤细胞；SF126 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
人肝癌细胞；SNU-423 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
人源胰腺癌细胞；PAXC-008
人肺腺癌细胞；NCI-H1299 RPMI1640+10%FBS
人B淋巴细胞；NCI-BL1339 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
小鼠结肠癌细胞；CT26.WT RPMI1640+10%FBS
人小细胞肺癌；NCI-H1618 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2
人乳腺癌细胞;HCC1937 RPMI1640+10%FBS
人肺退行性癌细胞；Calu-6 EMEM+10%FBS
脐静脉内皮细胞；HuUVECs-11
小鼠骨髓瘤细胞；NS-1 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2