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二、注意事项
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纤维在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纤维培养步骤。
三、操作流程
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
注意事项
我细胞库认为购买NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纤维的客户有培养细胞的经验，客户收到细胞后，严格按照本细胞培养条件更换完全培养基。如果因为客户缺少基本的细胞培养知识或培养条件而导致细胞各类问题，我库概不负责。对于因缺少细胞培养知识和时间，建议客户可联系我细胞库代为培养细胞和后续相关实验。
| 人B淋巴细胞瘤细胞；JM1 89%IMDM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人结肠癌细胞（低分化）；RKO 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 大鼠肝癌细胞；H4-II-E-C3 DMEM(高糖）+10%FBS | ||
| 人结肠癌细胞；HT55 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人红系白血病细胞；TF-1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人肺支气管鳞状细胞癌；KNS-62 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人甲状腺髓样癌细胞；TT 89%F12K+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人胰腺癌细胞；PANC-28 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人神经胶质细胞瘤细胞；U-251 MG 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人卵巢癌细胞；OV-90 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人白血病细胞；GDM-1 RPMI-1640 +10%FBS | 小鼠乳腺癌细胞；4T1 RPMI1640+10%FBS | ||
| 小鼠肾足细胞；mpc5 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 小鼠血管内皮瘤细胞；EOMA DMEM(高糖）+10%FBS（gibco） | 人大细胞肺癌细胞；NCI-H460 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人乳腺细胞；Hs 606.T 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 小鼠胰腺癌细胞；LTPA 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人乳腺导管癌细胞；HCC70 RPMI1640+10%FBS | ||
| 人T淋巴细胞白血病细胞 RPMI 1640 + 2mM Glutamine + 10% Foetal Bovine Serum (FBS). | 人肺动脉内皮细胞；HPAEC 内皮细胞培养基，sciencell，货号：1001 | 人神经母细胞瘤；TGW 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人肝癌细胞；HepG2/C3A 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人白血病细胞；NOMO-1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 小鼠肾上腺皮质瘤细胞；Y-1 cell line 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人咽鳞癌细胞；FaDu DMEM(高糖）+10%FBS | 人乳腺导管癌细胞；ZR-75-1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人淋巴瘤细胞；MT-2 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人肝母细胞瘤细胞；HuH-6 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人多形性恶性胶质瘤；T98G [T98-G] 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 正常人皮肤纤维母细胞；NHDF 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人食管癌细胞；TE-4 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | SV40转化的非洲绿猴肾细胞；COS-7 DMEM+10%FBS | 猪肾细胞系；PK15 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 |
