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二、注意事项
EBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见EBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)培养步骤。
三、操作流程
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
注意事项
我细胞库认为购买EBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)的客户有培养细胞的经验，客户收到细胞后，严格按照本细胞培养条件更换完全培养基。如果因为客户缺少基本的细胞培养知识或培养条件而导致细胞各类问题，我库概不负责。对于因缺少细胞培养知识和时间，建议客户可联系我细胞库代为培养细胞和后续相关实验。
| 人非小细胞肺癌细胞；NCI-H647 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人多发性骨髓瘤细胞；RPMI-8226 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人乳腺导管癌细胞；HCC2218 RPMI1640+10%FBS | ||
| 小鼠肝癌细胞；Hepa 1-6 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人鳞状细胞癌；SCC-15 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人小细胞肺癌细胞；NCI-H446 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人胚肾细胞；293T DMEM(高糖）+10%FBS | 人T淋巴细胞；CEM-3G-2 | 人脑神经母细胞瘤细胞 DMEM:F12(1:1)+10%FBS | ||
| 人横纹肌肉瘤细胞；A-673 DMEM+10%FBS | "人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087" 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 大鼠星形胶质细胞；RA 星形胶质培养基，sciencell，货号：1831 | ||
| 高转移人肝癌细胞；MHCC97-H 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人支气管平滑肌细胞；HBSMC 平滑肌细胞培养基，sciencell，货号：1101 | 低转移人肝癌细胞；MHCC97-L 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人乳腺癌细胞；HCC1569 RPMI1640+10%FBS | 表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞；293FT DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS | 人正常前列腺基质永生化细胞；WPMY-1 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人十二指肠腺癌；HuTu 80 89%EMEM+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人脑神经母细胞瘤细胞；SK-N-AS 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人横纹肌肉瘤细胞；Hs 729 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人非雄激素依赖型前列腺癌细胞；Tsu-Pr1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人子宫内膜癌细胞;RL95-2 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人卵巢癌紫衫醇耐药株；A2780/Taxo1 RPMI-1640 | 人黑色素瘤细胞 EMEM+10%FBS | 人非小细胞肺癌细胞；NCI-H1651 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 仓鼠肾成纤维细胞；BHK EMEM+10%FBS | 人正常前列腺上皮细胞；RWPE-1 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 人食道鳞状癌细胞；OE21 89%1640+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | ||
| 人脑神经母细胞瘤细胞；SK-N-FI 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 小鼠胚胎成纤维细胞；NIH/3T3 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 | 小鼠皮下结缔组织细胞；L- cell 89%DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗；37℃，5% CO2 |
