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人17羟孕酮(17-OHP)ELISA试剂盒定量
点击次数：179发布时间：2016/9/28 21:09:17
更新日期：2021/11/24 12:45:14
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：0.5 mU/L -22 mU/L
规格：48T/盒 96T/盒
使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中多巴胺 D2 受体抗体（D2R-Ab）活 性。
标本要求: 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
1. 标准品的稀释：人17羟孕酮(17-OHP)ELISA试剂盒定量提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl（样品*终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6. 加酶：孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.
10. 终止：孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
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计算
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。
1.人17羟孕酮(17-OHP)ELISA试剂盒定量从冷环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数多，推荐使用排枪加样。 4． 请次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含过高（样本 OD 值 大于标准品孔孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期 保存条件及有效期 保存条件及有效期 保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
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试剂、试剂盒：Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液
仪器、耗材：微量滴定板分光光度计或酶联仪
材料与设备
牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)分光光度计 (可在 595nm 处测量的) 或酶联仪 (带 595-nm 滤光片的)微量滴定板（ImmulonTM2，Dynatech Laboratories,Inc.)
试剂
Tris-缓冲盐溶液（TBS)(配方，见"试剂的配制" PP.184~189)
操作程序
1) 用 TBS 配制成一系列稀释度的 BSA 标准溶液，BSA 含量分別为：2000、1000、500、250、125、62.5 和 31.25ug/ml。每个待测的未知样品亦用 TBS 配制成一组倍比稀释的样品液。
2) 各取 5ul BSA 稀释液和未知样品稀释液，分别加入 1 ml Bradford 试剂。混合后，室温孵育 5 min, 并在 1 h 内测 A595nm 值。如有酶联仪可用，测 A595nm 值则更为方便。用微量滴定板法时，各样品取 7ul 加入 200ul Bradford 试剂中，用加样器吸头混合，并保证微孔中无气泡存在。若有气泡，则可用一 22 号针头将气泡刺破。室温下孵育 5 min 后，测定 A595nm 值。
3) 可测两种对照。—是测定存在于样品中的各种缓冲液，看看它们本身是否会显色。二是在有不同缓冲液存在的条件下测定中间浓度范围的 BSA 标准，看看这些缓冲液是否干扰 BSA 的显色。
4) 作标准曲线，确定未知样品的蛋白浓度。
注：由于σ32 纯化过程中所甩的-些试剂（如:SKL、脱氧胆酸钠和聚乙烯亚胺对本法有一定干扰，为此，我们找到了一种可以仿效的微量方法，即用 0、5、10、15 和 25ug/ml BSA 及 100、200 和 400 倍稀释的制备物样品进行测定。在微量滴定板各孔中，先加 100ul Bradfod 试剂，再分别加入各稀释样品 100ul, 然后按上述步骤搡作。
