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无蛋白血滤液的制备
点击次数：1124 发布时间：2017/4/18 15:42:28
测定血液或其它体液化学成分时，样品内蛋白质的存在常常干扰测定。因此，需要先做成无蛋白血滤液再行测定。
无蛋白血滤液制备的基本原理是以蛋白质沉淀剂沉淀蛋白，用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。现介绍几种常用的方法：
1.钨酸法
原理： 钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸：
Na2WO4 + H2SO4 → H2WO4 十Na2SO4
血液中蛋白质在pH 值小于等电点的溶液中可被钨酸沉淀：沉淀液过滤或离心，上清液即为无色而透明、pH 约等于6 的无蛋白滤液。可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等项测定使用。
制备方法：
(1）取50ml 锥形瓶1 只，加入蒸馏水7 份；（2）用奥氏吸管吸取抗凝血1 份，擦去管壁外血液，将吸管插入锥形瓶底部，缓缓放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹入，反复洗管3 次。充分混合，使红细胞完全溶解；( 3）加入0.333mol/l，硫酸溶液1 份，随加随摇，充分混匀，此时血液由鲜红变成棕色，静置5-10min ，使其酸化完全；(4) 加入10 ％钨酸钠1 份，随加随摇；(5）放置约5min 后，如振摇亦不再发生泡沫，说明蛋白质已完全变性沉淀。用定量滤纸过滤或离心（2,500r/min , 10min) ，即得完全澄清无色之无蛋白血滤液。
用此法制得的无蛋白血滤液为10 倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于0.lml全血。
试剂：(1) 10 ％钨酸钠溶液（2) 0.333mol/L 硫酸溶液
2.氢氧化锌法
原理：血液中蛋白质在pH 大于等电点的溶液中可用znZ 十来沉淀。生成的氢氧化锌本身为胶体可将血中葡萄糖以外的许多还原性物质吸附而沉淀，所以此法所得滤液*适作血液葡萄糖的测定（因为葡萄糖多是利用它的还原性来定量的）。但测定尿酸和非蛋白氮时含量降低，不宜使用此滤液。
制备方法：(1)取干燥、洁净的50ml 锥形瓶或大试管1 支，准确加入7 份水；(2）加入混匀的抗凝血1 份，摇匀；(3）加入10 ％硫酸锌溶液1 份，摇匀；(4）慢慢加入0.5mol / L 氢氧化钠溶液1 份，边加边摇，放置5min ，用定量滤纸过滤或离心（2,500，10min ) ，除去沉淀，便得到完全澄清的无蛋白血滤液。此滤液亦为稀释10 倍之血滤液。
试剂：(l) 10 ％硫酸锌溶液（2) 0.5mol / L 氢氧化钠溶液
3.三氯醋酸法
原理：三氯醋酸为一有机强酸，能使蛋白质变性而沉淀。
制备方法：取10 ％三氯醋酸9 份置于锥形瓶或大试管中，加1 份已充分混匀的抗凝血液。加时要不断摇动，使其均匀。静置5min ，过滤或离心。即得10 倍稀释之清明透亮的滤液。
原创作者：上海谷研生物科技有限公司
