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关于培养细胞样品裂解的方法
点击次数：398 发布时间：2017/6/1 15:44:03
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的*终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
HEC-1-B(人子宫内膜腺癌细胞)5×106cells/瓶×2
Hela(人宫颈癌细胞)5×106cells/瓶×2
Hep 3B(人肝癌细胞)5×106cells/瓶×2
Hep G2(人肝癌细胞)5×106cells/瓶×2
HEp-2(人喉表皮样癌细胞)5×106cells/瓶×2
Hepa 1-6(小鼠肝癌细胞)5×106cells/瓶×2
HFL1(人肺成纤维细胞)5×106cells/瓶×2
HGC-27(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2
HIC(人小肠癌细胞)5×106cells/瓶×2
HK-2(人肾小管上皮细胞)5×106cells/瓶×2
HL-60(人早幼粒急性白血病细胞)5×106cells/瓶×2
HL-7702(人肝正常细胞)5×106cells/瓶×2
HMy2.CIR(人B淋巴母细胞)5×106cells/瓶×2
HO-8910(人卵巢癌细胞)5×106cells/瓶×2
原创作者：上海谷研生物科技有限公司
