人可溶性细胞因子受体(sCKR)elisa试剂盒使用说明书
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为20ng/mL。）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

洗涤方法:
任何一个成功的ELISA检测，正确的洗板方法是非常关键和重要的一方面。连贯的洗板也很有必要的。在稀释浓缩洗涤液时，请使用去离子水或者蒸馏水。
◆ 洗涤瓶或多通道移液器
保证洗瓶内压强良好或者移液器的管头被适当调整并且无碎屑。检查板内的板条是否安好。将板条编号以防在倾泄的时候松动便于调整。首先，倾泄酶标板以清空内容物。根据试剂盒内推荐的体积向每孔内滴加洗液。若实验步骤中要求浸泡，则定时将每孔浸泡完全。将板内液体倾倒完全，用干净纸巾擦拭。按照说明书所示重复以上步骤。*后一次洗板之后，将板内液体倾倒完全，用干净纸巾拍打表面并擦干。切勿让孔内干燥。按照试剂盒内说明书迅速进行下一步实验操作。
◆ 自动洗板仪
将自动洗板仪接入适当真空（根据制造商的说明）。确保每管都被适当抽吸。首先，通过吸或者倾倒将板清空。根据试剂盒内推荐的体积向每孔内滴加洗液。若实验步骤中要求浸泡，则定时将每孔浸泡完全。完全抽吸各孔，保证没有洗液残留。在孔内液体被完全抽走之后不要再将装置至于孔内过分抽吸。按照说明书所示重复以上步骤。*后一次洗板之后，将板内液体倾倒完全，用干净纸巾拍打表面并擦干。切勿让孔内干燥。按照试剂盒内说明书迅速进行下一步实验操作。
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。
3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育30 分钟。
5. 弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，方法同步骤3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15 分钟左右（根据实际显**况酌情缩短或延长，但不可超过30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。

结果判断:
1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
人组织蛋白酶B(CTSB)检测试剂盒灵敏度、检测范围、特异性和重复性:
●灵敏度：*小可测：0.119ng/mL
●检测范围：0.313-20ng/mL
● 重复性：板内，板间变异系数均<10%。
● 特异性:可检测重组或天然的人组织蛋白酶B(CTSB)，且与其它相关蛋白无交叉反应。
操作概要
1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟
2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟
3. 洗涤 3 次
4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟
5. 洗涤 5 次
6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右
7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值
8. 结果计算