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小鼠促黄体生成素（LH）定量检测试剂盒技术原理
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上传时间：2017/8/3 9:26:00
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上 传 者：上海谷研生物科技有限公司
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小鼠促黄体生成素（LH）定量检测试剂盒检测原理：
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被小鼠促黄体生成素（LH）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中小鼠促黄体生成素（LH）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中小鼠促黄体生成素（LH）含量。
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
标准规格酶标仪
精密移液器及一次性吸头
蒸馏水
一次性试管
吸水纸
【操作步骤】
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；标准品和待测样本孔均再加酶标工作液50μL；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。
7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
9、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。*终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
小鼠促黄体生成素（LH）定量检测试剂盒【样本要求】
1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为75-2400pg/mL，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用标准品稀释液稀释后测定准确结果（75-2400pg/mL范围内），乘以总稀释倍数即为样本*终浓度。
6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
Anti-Annexin A 规格:规格： 0.2ml产品名称:膜粘连蛋白-A抗体
Anti-Annexin II 规格:规格： 0.2ml产品名称:膜粘连蛋白-2抗体
Anti-Annexin V 规格:规格： 0.1ml产品名称:膜粘连蛋白-5抗体
Anti-Annexin V 规格:规格： 0.1ml产品名称:重组膜粘连蛋白-5抗体
小鼠促黄体生成素（LH）定量检测试剂盒
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