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牛钙磷蛋白（CAPS）ELISA检测试剂盒
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上传时间：2017/8/10 9:48:09
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上 传 者：上海谷研生物科技有限公司
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牛钙磷蛋白（CAPS）ELISA检测试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛钙磷蛋白(CAPS)捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛钙磷蛋白(CAPS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
牛钙磷蛋白（CAPS）ELISA检测试剂盒操作步骤
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体50μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
所有孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
L-α-氨基异戊酸进口、国产英文名称:L-Valine含量:BR，99%
D-2-氨基-3-甲基戊酸进口、国产英文名称:D-Valine含量:BR，99%
DL-α-氨基异戊酸进口、国产英文名称:DL-Valine含量:BR，99%
芴甲氧羰基-L-缬氨酸进口、国产英文名称:Fmoc-L-valine含量:BR，99%
苄氧羰基-D-缬氨酸进口、国产英文名称:CBZ-D-Valine含量:BR，99%
牛钙磷蛋白（CAPS）ELISA检测试剂盒
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