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DNA是所有生物体的基本组成物质
细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合,形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后,这两种核蛋白将混杂在一起。因此,要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不同浓度的盐溶液中具有不同的溶解度,如在0.15mol/L NaC1的稀盐溶液中核糖核蛋白的溶解度,脱氧核糖核蛋白的溶解度则*小(仅约为在纯水中的1%);而在l mol/L NaCl的浓盐溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度增大,至少是在纯水中的2倍,核糖核蛋白的溶解度则明显降低。根据这种特性,调整盐浓度即可把这两种核蛋白分开。因此,在细胞破碎后,用稀盐溶液,反复清洗,所得沉淀即为脱氧核糖核蛋白成分。
分离得到的脱氧核糖核蛋白,用十二烷基硫酸钠(SDS)使蛋白质成分变性,让DNA游离出来,再用含有异戊醇的沉淀除去变性蛋白质。*后根据核酸只溶于水而不溶于有机溶剂的特点,加入95%的乙醇即可从除去蛋白质的溶液中把DNA沉淀出来,获得产品。
当细胞破碎时,细胞内的脱氧核糖核酸酶(DNase)立即开始降解DNA,如果在破碎细胞后不及时采取抑制酶活的措施,*后将会得不到任何DNA。为此,如在本实验中加入柠檬酸盐、EDTA等螯合剂以除DNase必需的Mg2+离子,使DNase活性降低,并要求整个分离制备的过程均在4℃以下进行,以减少DNase的降解作用,*后加入SDS使所有的蛋白质(包括DNase)变性。当然如果希望获得更大分子的DNA时,则在细胞破碎后,及时加入SDS使蛋白质(包括DNase)变性,并加入蛋白酶K,降解所有的蛋白质成为碎片或氨基酸,及时阻止DNase的降解作用。
DNA分子很大、很长,在水中呈黏稠状,但DNA链的双螺旋结构不宜小角度的折叠,使之DNA分子具有刚性,即分子是僵直的(stiff),小角度的折叠和压挤等剪切力,将使DNA断裂成碎片。为保证获得大分子DNA,操作时应避免急裂振摇,或过大的离心力。转移吸取DNA时不可用过细的吸头,不可猛吸猛放,更不能用细的吸头反复吹吸。
人封闭抗体(BA)elisa试剂盒进口/分装英文名称:Human Blocking antibody,BA ELISA Kit规格:96T/48T
人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA试剂盒进口/原装英文名称:Human ovalbumin specific IgE,OVA sIgE ELISA Kit 规格:96T/48T
人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒特价促销英文名称:Human anti-neutrophil granules antibody,ANGA ELISA Kit规格:96T/48T
人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)ELISA试剂盒 特价供应英文名称:Human anti-apolipoprotein A1 antibody,Apo A1 ELISA Kit规格:96T/48T
人抗胰岛素受体抗体(AIRA)ELISA试剂盒 进口/分装英文名称:Human anti-insulin receptor antibody,AIRA ELISA Kit规格:96T/48T
人抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA试剂盒 进口/原装英文名称:Human anti-centrol and centrosome antibody,ACA ELISA Kit规格:96T/48T
人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒 特价促销英文名称:Human anti-albumin antibody,AAA ELISA Kit规格:96T/48T
人抗环胍氨酸肽抗体(CCP)ELISA试剂盒特价供应英文名称:Human anti-cyclic citrullinated peptide,CCP ELISA Kit规格:96T/48T
人抗核周因子抗体(APF)ELISA试剂盒进口/分装英文名称:Human anti-perinuclear factor,APF ELISA Kit规格:96T/48T
人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒进口/原装英文名称:Human anti-Actin antibody,AAA ELISA Kit规格:96T/48T
人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)ELISA试剂盒特价促销英文名称:Human heparin associated antibody,HIT ELISA Kit规格:96T/48T
人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒特价供应英文名称:Human anti-glycoprotein antibody,GP ELISA Kit规格:96T/48T
人抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒进口/分装英文名称:Human anti-Monocyte antibody,AMA ELISA Kit规格:96T/48T
人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒 进口/原装英文名称:Human oxidized lowdensity lipoprotein antibody,OLAb ELISA Kit 规格:96T/48T
人沙眼衣原体(CT)ELISA试剂盒特价促销英文名称:Human Chlamydia trachomatis,CT ELISA Kit规格:96T/48T
人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA试剂盒特价供应英文名称:Human hepatitis B virus surface antigen,HBsAg ELISA Kit 规格:96T/48T
人抗乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)ELISA试剂盒 进口/分装英文名称:Human anti-hepatitis B virus core antibody,HBcAb ELISA Kit规格:96T/48T