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细胞培养的方法
点击次数：164 发布时间：2017/7/5
操作方面
1. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。自己的东西自己包自己烘干。枪头什么的只要有可能污染就换。
2. 严格无菌操作。操作台一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
3. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，记得要勤换。身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。
4. 细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。晚上离开的时候给细胞房照紫外，超净台是用完就开。的是同一时间就你一个人在细胞房养细胞。
5. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的*头部尽量深的在液面以下。
细胞方面
1. 买细胞要买靠谱的，比如 ATCC的细胞或者北纳生物菌种保藏中心（www.bncc.org.cn）提供的细胞。上面都会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染；迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基。
3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。
