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真细菌种属鉴定 PCR Mix 3100 次
点击次数：180发布时间：2017/1/11 16:49:22
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
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相关标签：核酸扩增
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真细菌种属鉴定 PCR Mix 3100 次产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA 链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
本试剂盒提供合成 cDNA 链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. *长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
真细菌种属鉴定 PCR Mix 3100 次使用方法:
一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系:RNA RNA 100-500 ng poly(A) mRNA 10-500 ng或专一的 RNA 0.01 pg-500 ng
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或 RNA 模板专一性引物 15-20 pmol
注意：随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合
成的平均长度成反比。
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20 uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，不需要纯化。
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