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JM109 化学感受态细胞0.1mL×10
点击次数：125发布时间：2017/1/12 9:54:51
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：克隆及表达
优质供应
详细内容
JM109 化学感受态细胞0.1mL×10运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉JM109 化学感受态细胞0.1mL×10淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温JM109 化学感受态细胞0.1mL×10下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
人胆碱乙酰转移酶(ChAT)ELISA KitHuman ChAT ELISA Kit
人胆红素氧化代谢物 ELISA KitHuman Biopyrrin ELISA Kit
人胆固醇7α-羟化酶(CYP7A)ELISA KitHuman CYP7A ELISA Kit
人单丝氨酸蛋白激酶1(LIMK1)ELISA KitHuman LIMK1 ELISA Kit
人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA KitHuman MCP-4 ELISA kit
人单纯疱疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)ELISA KitHuman Herpes simplex virus,HSV-Ag1 ELISA Kit
人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡ-Ab)ELISA KitHuman Herpes simplexvirus Ⅱ IgM antibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit
人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡ-Ab)ELISA KitHuman Herpes simplexvirus Ⅱ IgG antibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit
人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgM)ELISA KitHuman herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)antibody(IgM)ELISA kit
人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgG)ELISA KitHuman herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)antibody(IgG)ELISA Kit
人单纯疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgM)ELISA KitHuman herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)antibody(IgM)ELISA kit
人单纯疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgG)ELISA KitHuman herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)antibody(IgG)ELISA kit
人带3蛋白(Band3)ELISA KitHuman Band3 protein ELISA kit
人大内皮素(Big ET-1)ELISA KitHuman Big Endothelin,Big ET-1 ELISA Kit
人存活素抗体/生存蛋白(Surv)ELISA KitHuman anti-Survivin antibody,Surv ELISA Kit
人脆性组氨酸三联体(FHIT)ELISA KitHuman FHIT ELISA Kit
人催乳素诱导蛋白(PIP)ELISA KitHuman PIP ELISA Kit
人催乳素抑制激素(PIH)ELISA KitHuman PIH ELISA Kit
人催乳素释放激素(PRH)ELISA KitHuman PRH ELISA Kit
人催乳素(PRL)ELISA KitHuman Prolactin/Luteotropic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit
人催产素受体(OXTR)ELISA KitHuman OXTR ELISA Kit
人促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA Kithuman gonadotropin-releasing hormone,GnRH ELISA Kit
人促酰化蛋白(ASP)ELISA KitHuman acylation stimulating protein,ASP ELISA Kit
人促甲状腺素受体(TSHR)抗体ELISA KitHuman TSHR antibody ELISA Kit
人促甲状腺素受体(TSHR)ELISA KitHuman TSHR ELISA Kit
人次黄嘌呤氧化酶ELISA KitHuman Hypoxanthine Oxidase ELISA Kit
人雌酮(estrone,E1)ELISA KitHuman estrone,E1 ELISA kit
人雌激素受体β(ESR2)ELISA KitHuman Estrogen receptor beta,ESR2 ELISA kit
人雌激素硫酸转移酶(SULT1E1)ELISA KitHuman SULT1E1 ELISA Kit
人垂草扁桃酸(VMA)ELISA KitHuman VMA ELISA Kit
人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA KitHuman PRF1/PFP ELISA Kit
人程序性细胞死亡因子4(PDCD4)ELISA KitHuman PDCD4 ELISA Kit
人程序性死亡因子配体1(PD-L1/CD274)ELISA KitHuman PD-L1 ELISA Kit
人程序性死亡-1(PD-1)ELISA KitHuman PD-1 ELISA Kit
JM109 化学感受态细胞0.1mL×10人成纤维细胞生长因子8(FGF8)ELISA KitHuman FGF8 ELISA Kit
人成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA KitHuman FGF6 ELISA kit
人成纤维细胞生长因子4(FGF4)ELISA KitHuman FGF4 ELISA kit
人成纤维细胞生长因子21(FGF21/UNQ3115/PRO10196)ELISA KitHuman FGF21 ELISA kit
人成纤维细胞生长因子13(FGF-13)ELISA KitHuman FGF-13 ELISA Kit
人成纤维细胞生长因子10(FGF10)ELISA KitHuman FGF10 ELISA Kit
人巢蛋白1(NID1)ELISA KitHuman Nidogen 1,NID1 ELISA Kit
人超敏热休克蛋白70(HSP-70)ELISA KitHuman Ultra Sensitive Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit
人超敏热休克蛋白60(HSP-60)ELISA KitHuman Ultra Sensitive Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit
人超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA KitHuman high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit
人超磷酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)ELISA KitHuman hyper phosphorylated MAPT ELISA kit
人肠道病毒71型(EV71)抗体(IgM)ELISA KitHuman enterovirus 71 virus(EV71)antibody(gM)ELISA kit
人层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)ELISA KitHuman LAMC2 ELISA Kit
人层粘连蛋白β1(LN-β1)ELISA KitHuman Laminin β1,LN-β1 ELISA Kit
人层粘连蛋白-5(LN-5)ELISA KitHuman Laminin-5,LN-5 ELISA Kit
人布卢姆综合征蛋白(BLM)ELISA KitHuman BLM ELISA Kit
人补体因子I(CFI)ELISA KitHuman CFI ELISA Kit
人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)ELISA KitHuman CFHR1 ELISA Kit
人补体因子H(CFH)ELISA KitHuman CFH ELISA Kit
人补体因子B前体(pre-CFB)ELISA KitHuman complement factor B precursor,pre-CFB ELISA Kit
人补体片段4d(C4d)ELISA KitHuman Complement Fragment 4d,C4d ELISA Kit
人补体片段3d(C3d)ELISA KitHuman Complement Fragment 3d,C3d ELISA Kit
