产品展示
SURE 化学感受态细胞0.1mL×10
点击次数：122发布时间：2017/1/12 9:55:15
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：克隆及表达
优质供应
详细内容
SURE 化学感受态细胞0.1mL×10产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
SURE 化学感受态细胞0.1mL×10使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
人对氨基苯甲酸(PABA)ELISA KitHuman para-aminobenzoic acid,PABA ELISA Kit
人端粒重复序列结合因子2(TERF2)ELISA KitHuman TERF2 ELISA kit
人端粒重复序列结合因子1(TERF1)ELISA KitHuman TERF1 ELISA kit
人端粒酶逆转录酶(TERT)ELISA KitHuman TERT ELISA Kit
人端粒保护蛋白1(POT1)ELISA KitHuman POT1 ELISA kit
人毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(mAChRM2)自身抗体ELISA KitHuman muscarinic acetylcholine receptor M2(mAChRM2)autoantibody ELISA kit
人丁型肝炎病毒抗体(HDV antibody)ELISA KitHuman hepatitis D virus antibody,HDV antibody ELISA Kit
人丁型肝炎病毒(HDV)抗原ELISA KitHuman hepatitis D virus(HDV) antigen ELISA Kit
人丁酰胆碱酯酶(BCHE)ELISA KitHuman Cholinesterase,BCHE ELISA kit
人调宁蛋白1(CNN1)ELISA KitHuman Calponin-1,CNN1 ELISA Kit
人凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)ELISA KitHuman BIRC4 ELISA kit
人凋亡相关蛋白激酶(DAPK)ELISA KitHuman DAPK ELISA Kit
人凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA KitHuman apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1 ELISA Kit
人淀粉状蛋白β(A4)前体蛋白结合家族B成员1(FE65)ELISA KitHuman FE65 ELISA kit
人电子转运黄素蛋白-泛醌氧化还原酶/电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)ELISA KitHuman ETFDH ELISA kit
人电压门控钾通道抗体(VGKC-ab)ELISA KitHuman voltage-gated potassium channel antibody,VGKC-ab ELISA Kit
人电压门控钾通道(VGKC)ELISA KitHuman voltage-gated potassium channel,VGKC ELISA Kit
人第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN/MMAC1)ELISA KitHuman PTEN ELISA Kit
人抵抗素样分子β(RELM-β)ELISA KitHuman RELM-β ELISA Kit
人抵抗素(Resistin)ELISA Kithuman Resistin ELISA KIT
人低氧诱导因子3α(HIF-3α)ELISA KitHuman HIF-3α ELISA Kit
人低氧诱导因子2(HIF-2)ELISA KitHuman HIF-2 ELISA kit
人低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)ELISA KitHuman LRP-5 ELISA Kit
人低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)抗体(IgG)ELISA KitHuman LRP-4 IgG ELISA Kit
SURE 化学感受态细胞0.1mL×10低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)ELISA KitHuman LRP-4 ELISA Kit
人低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)ELISA KitHuman LRP-1 ELISA Kit
人登革热抗体IgM(DF-Ab IgM)ELISA KitHuman dengue fever antibody IgM,DF-Ab IgM ELISA kit
人登革热(DF)抗体(IgG)ELISA KitHuman DF IgG ELISA kit
人的牛血清白蛋白(BSA)ELISA KitHuman bovine serum albumin,BSA ELISA kit
人蛋白水解诱导因子/皮离蛋白(PIF/DCD)ELISA KitHuman PIF/DCD ELISA Kit
人蛋白酶激活复合体亚基2(PSME2)ELISA KitHuman PSME2 ELISA kit
人蛋白酶3(PR3)ELISA KitHuman PR3 ELISA Kit
人蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体ELISA KitHuman Tyrosine Phosphatase Autoantibodies ELISA Kit
人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)ELISA KitHuman protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B ELISA Kit
人蛋白聚糖4(PRG4)ELISA KitHuman PRG4 ELISA Kit
人蛋白精氨酸脱亚氨酶4(PADI4)ELISA KitHuman PADI4 ELISA kit
人蛋白精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)ELISA KitHuman PRMT1 ELISA Kit
人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)ELISA KitHuman Protein Kinase C beta II,PKC-bII ELISA Kit
人蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)ELISA KitHuman PGP 9.5 ELISA Kit
人蛋白C(PC)ELISA KitHuman Protein C ELISA Kit
人蛋白ATP1B4(ATP1B4)ELISA KitHuman ATP1B4 ELISA Kit
人蛋白(肽酰脯氨酰顺/反异构酶)NIMA结合1(PIN1)ELISA KitHuman PIN1 ELISA Kit
人蛋白 DJ-1(PARK7)ELISA KitHuman Protein DJ-1,PARK7 ELISA kit
人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA KitHuman Elastase ELISA Kit
人胆酸(Cholic acid)ELISA KitHuman Cholic acid ELISA Kit
人胆碱转运体样蛋白4(SLC44A4)ELISA KitHuman Choline transporter-like protein 4,SLC44A4 ELISA kit
