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潮霉素 B 干粉250mg产品及特点:
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为 40kDa,由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为 40kDa,由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高,易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒,它具有下列特点:
1. 一站式套装,含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱,操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质,其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱,无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
运输及保存:
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
潮霉素 B 干粉250mg使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2. 用 5 倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积,下同)自备去离子水洗柱,共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱,进行平衡,使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清,将细胞沉淀(约100 mg)悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中,4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后,再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物:
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-c2)a) 超声破碎细胞,功率 30 W,保持细胞低温(0℃),直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。)b) 为使溶液澄清,向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF(10mg/mL)。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟,以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱,收集上清样品,留样做 SDS-PAGE 电泳对照,其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白,直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-p2)a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞,沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
大鼠α1微球蛋白(α1-MG)elisa试剂盒,英文名:α1-MG ELISA Kit
大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒,英文名:α1-AGP ELISA Kit
大鼠α1抗胰蛋白酶前体(pre-α1-AT)ELISA试剂盒,英文名:pre-α1-AT ELISA Kit
大鼠VGF神经生长因子诱导蛋白(VGF)ELISA试剂盒,英文名:VGF ELISA Kit
大鼠T细胞活化核因子5(NFAT5)ELISA试剂盒,英文名:NFAT5 ELISA Kit
大鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒,英文名:TLR-9/CD289 ELISA Kit
大鼠Toll样受体9(TLR9)ELISA试剂盒,英文名:TLR9 ELISA Kit
大鼠Toll样受体7(TLR-7)ELISA试剂盒,英文名:TLR-7 ELISA Kit
大鼠Toll样受体4(TLR-4)ELISA试剂盒,英文名:TLR-4 ELISA Kit
大鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒,英文名:TLR4 ELISA Kit
大鼠toll样受体3(TLR3)ELISA试剂盒,英文名:TLR3 ELISA Kit
大鼠Toll样受体2(TLR-2)ELISA试剂盒,英文名:TLR-2 ELISA Kit
大鼠toll样受体1(TLR1)ELISA试剂盒,英文名:TLR1 ELISA Kit
大鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA试剂盒,英文名:TIEG1 ELISA Kit
大鼠TAR DNA结合蛋白43(TARDBP)ELISA试剂盒,英文名:TARDBP ELISA Kit
大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA试剂盒,英文名:SDC1 ELISA Kit
大鼠SHC转化蛋白1(SHC1)ELISA试剂盒,英文名:SHC1 ELISA Kit
大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒,英文名:S-100 ELISA Kit
大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒,英文名:S-100B ELISA Kit
大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA试剂盒,英文名:S100B ELISA Kit
大鼠S100-A5蛋白(S100A5)ELISA试剂盒,英文名:S100A5 ELISA Kit
大鼠Rho鸟苷酸交换因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)ELISA试剂盒,英文名:Arhgef7/Pak3bp/Pixb ELISA Kit
大鼠Ras相关C3肉毒素底物1(RAC1)ELISA试剂盒,英文名:RAC1 ELISA Kit
潮霉素 B 干粉250mg大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒,英文名:P-Selectin/CD62P ELISA Kit
大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒,英文名:SP-R ELISA Kit
大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒,英文名:SP ELISA Kit
大鼠P53(P53)ELISA试剂盒,英文名:P53 ELISA Kit
大鼠P27蛋白(P27)ELISA试剂盒,英文名:P27 ELISA Kit
大鼠P21蛋白(P21)ELISA试剂盒,英文名:P21 ELISA Kit
大鼠P0蛋白(p0)ELISA试剂盒,英文名:p0 ELISA Kit
大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA试剂盒,英文名:AcSDKP ELISA Kit
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒,英文名:NAG ELISA Kit
大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒,英文名:NT-proBNP ELISA Kit
大鼠Na-K-ATP酶(Na-K-ATPase)ELISA试剂盒,英文名:Na-K-ATPase ELISA Kit
大鼠M型肌酸激酶(CKM)ELISA试剂盒,英文名:CKM ELISA Kit
大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒,英文名:L-Selectin/CD62L ELISA Kit
大鼠L-乳酸脱氢酶(L-LDH)ELISA试剂盒,英文名:L-LDH ELISA Kit
大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒,英文名:PAL ELISA Kit
大鼠KiSS-1受体(KISS1R)ELISA试剂盒,英文名:KISS1R ELISA Kit
大鼠Kelch样ECH相关蛋白1(KEAP1)ELISA试剂盒,英文名:KEAP1 ELISA Kit
大鼠I型胶原(COL1)ELISA试剂盒,英文名:COL1 ELISA Kit
大鼠G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)ELISA试剂盒,英文名:GPBAR1 ELISA Kit
大鼠Ghrelin受体(Ghsr)ELISA试剂盒,英文名:Ghsr ELISA Kit
大鼠GATA结合蛋白4(GATA4)ELISA试剂盒,英文名:GATA4 ELISA Kit
大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒,英文名:PⅢNT ELISA Kit