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硫酸庆大霉素溶液 ,15mg/mL2mL
点击次数：221发布时间：2017/1/12 10:31:56
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：克隆及表达
优质供应
详细内容
硫酸庆大霉素溶液 ,15mg/mL2mL运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下硫酸庆大霉素溶液 ,15mg/mL2mL振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠白介素12(IL-12/P70)elisa试剂盒，英文名：IL-12/P70 ELISA Kit
大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒，英文名：IL-12/P40 ELISA Kit
大鼠白介素12(IL－12)ELISA试剂盒，英文名：IL－12 ELISA Kit
大鼠白介素11(IL-11)ELISA试剂盒，英文名：IL-11 ELISA Kit
大鼠白介素10(IL－10)ELISA试剂盒，英文名：IL－10 ELISA Kit
大鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒，英文名：IL-10 ELISA Kit
大鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒，英文名：IL-1 ELISA Kit
大鼠白蛋白(albumin)ELISA试剂盒，英文名：albumin ELISA Kit
大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒，英文名：IDS ELISA Kit
大鼠癌胚抗原(CEA)ELISA试剂盒，英文名：CEA ELISA Kit
大鼠阿米洛利敏感钠通道α亚基(SCNN1A)ELISA试剂盒，英文名：SCNN1A ELISA Kit
大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒，英文名：Orexin A ELISA Kit
大鼠阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒，英文名：POMC ELISA Kit
大鼠δ氨基乙酰丙酸脱水酶(ALAD)ELISA试剂盒，英文名：ALAD ELISA Kit
大鼠γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA试剂盒，英文名：γ-GCS ELISA Kit
大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒，英文名：IFI16/p16 ELISA Kit
大鼠γ干扰素受体(IFN-γR)ELISA试剂盒，英文名：IFN-γR ELISA Kit
大鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒，英文名：IFN-γ ELISA Kit
大鼠γ干扰素(IFNγ)ELISA试剂盒，英文名：IFNγ ELISA Kit
大鼠γ分泌酶(GACE)ELISA试剂盒，英文名：GACE ELISA Kit
大鼠γ-氨基丁酸受体亚基α1(GABRA1)ELISA试剂盒，英文名：GABRA1 ELISA Kit
大鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒，英文名：GABA ELISA Kit
大鼠β-转导重复相容蛋白(β-TrCP)ELISA试剂盒，英文名：β-TrCP ELISA Kit
大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒，英文名：β-TG ELISA Kit
大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒，英文名：BTC ELISA Kit
大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)ELISA试剂盒，英文名：BACE2 ELISA Kit
大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA试剂盒，英文名：BACE1 ELISA Kit
大鼠β羟丁酸(βOHB)ELISA试剂盒，英文名：βOHB ELISA Kit
大鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA试剂盒，英文名：β-EPR ELISA Kit
大鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒，英文名：β-EP ELISA Kit
大鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒，英文名：IFN-β/IFNB ELISA Kit
大鼠β防御素2(DEFB2)ELISA试剂盒，英文名：DEFB2 ELISA Kit
大鼠β-防御素(β-DF)ELISA试剂盒，英文名：β-DF ELISA Kit
大鼠β-防御素(β-Defensins)ELISA试剂盒，英文名：β-Defensins ELISA Kit
大鼠β防御素(β-Defensin)ELISA试剂盒，英文名：β-Defensin ELISA Kit
大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒，英文名：Aβ1-42 ELISA Kit
大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ 1-42)ELISA试剂盒，英文名：Aβ 1-42 ELISA Kit
大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒，英文名：Aβ1-40 ELISA Kit
大鼠β淀粉样蛋白(Aβ)ELISA试剂盒，英文名：Aβ ELISA Kit
硫酸庆大霉素溶液 ,15mg/mL2mL大鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒，英文名：βGAL ELISA Kit
大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)ELISA试剂盒，英文名：ITG β2/CD11+CD18 ELISA Kit
大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒，英文名：BMG/β2-MG ELISA Kit
大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA试剂盒，英文名：β2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit
大鼠β1整合素(ITG β1)ELISA试剂盒，英文名：ITG β1 ELISA Kit
大鼠α烯醇化酶(α-enolase)ELISA试剂盒，英文名：α-enolase ELISA Kit
大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒，英文名：a-Glu ELISA Kit
大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒，英文名：α-SMA ELISA Kit
大鼠α肌动蛋白(α Actin)ELISA试剂盒，英文名：α Actin ELISA Kit
大鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒，英文名：α-GST ELISA Kit
大鼠α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒，英文名：IFN-α ELISA Kit
大鼠α干扰素(IFNα)ELISA试剂盒，英文名：IFNα ELISA Kit
大鼠α-辅肌动蛋白1(ACTN-1)ELISA试剂盒，英文名：ACTN-1 ELISA Kit
大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒，英文名：AFU ELISA Kit
大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA试剂盒，英文名：α2-MG ELISA Kit
大鼠α2-HS糖蛋白(AHSG)ELISA试剂盒，英文名：AHSG ELISA Kit
