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硫酸新霉素干粉1g运输及保存:
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2. 用 5 倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积,下同)自备去离子水洗柱,共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱,进行平衡,使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清,将细胞沉淀(约100 mg)悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中,4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后,再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物:
硫酸新霉素干粉1g1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-c2)a) 超声破碎细胞,功率 30 W,保持细胞低温(0℃),直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。)b) 为使溶液澄清,向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF(10mg/mL)。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟,以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱,收集上清样品,留样做 SDS-PAGE 电泳对照,其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白,直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-p2)a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞,沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清小心转移到新离心管中。
产品及特点:
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为 40kDa,由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高,易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒,它具有下列特点:
1. 一站式套装,含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱,操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质,其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱,无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)elisa试剂盒,英文名:HIF-1α ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白受体(LDLR)ELISA试剂盒,英文名:LDLR ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)ELISA试剂盒,英文名:LDL-IC ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒,英文名:LDL-C ELISA Kit
大鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒,英文名:LDL ELISA Kit
大鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒,英文名:PP ELISA Kit
大鼠蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒,英文名:PRG4 ELISA Kit
大鼠蛋白激酶G(PKG)ELISA试剂盒,英文名:PKG ELISA Kit
大鼠蛋白激酶C(PKC)ELISA试剂盒,英文名:PKC ELISA Kit
大鼠蛋白激酶C epsilon(PKCε)ELISA试剂盒,英文名:PKCε ELISA Kit
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒,英文名:PKB ELISA Kit
大鼠弹性蛋白(ELN)ELISA试剂盒,英文名:ELN ELISA Kit
大鼠胆囊收缩素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒,英文名:CCK-8 ELISA Kit
大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒,英文名:CCK ELISA Kit
大鼠胆囊收缩素(CCK)ELISA试剂盒,英文名:CCK ELISA Kit
大鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)ELISA试剂盒,英文名:ChAT ELISA Kit
大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒,英文名:CETP ELISA Kit
大鼠胆固醇24S-羟化酶(CYP46)ELISA试剂盒,英文名:CYP46 ELISA Kit
大鼠胆固醇(CH)ELISA试剂盒,英文名:CH ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒,英文名:MCP-4/CCL13 ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4)ELISA试剂盒,英文名:MCP-4 ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒,英文名:MCP-3/CCL7 ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒,英文名:MCP-2/CCL8 ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒,英文名:MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit
大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA试剂盒,英文名:MCP-1 ELISA Kit
大鼠单胺氧化酶(MAO)ELISA试剂盒,英文名:MAO ELISA Kit
大鼠大内皮素(Big ET)ELISA试剂盒,英文名:Big ET ELISA Kit
硫酸新霉素干粉1g大鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒,英文名:PRL ELISA Kit
大鼠催产素(OT)ELISA试剂盒,英文名:OT ELISA Kit
大鼠促胰液素/胰泌素(Sct)ELISA试剂盒,英文名:Sct ELISA Kit
大鼠促性腺激素抑制激素(GnIH)ELISA试剂盒,英文名:GnIH ELISA Kit
大鼠促性腺激素释放激素受体抗体(GNRHR-Ab)ELISA试剂盒,英文名:GNRHR-Ab ELISA Kit
大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)ELISA试剂盒,英文名:GnRHR ELISA Kit
大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒,英文名:GnRH ELISA Kit
大鼠促酰化蛋白(ASP)ELISA试剂盒,英文名:ASP ELISA Kit
大鼠促生长激素释放激素(GRH)ELISA试剂盒,英文名:GRH ELISA Kit
大鼠促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)ELISA试剂盒,英文名:CRF ELISA Kit
大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒,英文名:ACTH ELISA Kit
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒,英文名:CRH ELISA Kit
大鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒,英文名:FSH ELISA Kit
大鼠促甲状腺素受体(TSHR)ELISA试剂盒,英文名:TSHR ELISA Kit
大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒,英文名:TRH ELISA Kit
大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒,英文名:TSH ELISA Kit
大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒,英文名:TSH ELISA Kit
大鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒,英文名:LH ELISA Kit
大鼠雌一醇(E1)ELISA试剂盒,英文名:E1 ELISA Kit
大鼠雌酮(E1)ELISA试剂盒,英文名:E1 ELISA Kit
大鼠雌三醇(E3)ELISA试剂盒,英文名:E3 ELISA Kit
大鼠雌激素受体(ER)ELISA试剂盒,英文名:ER ELISA Kit
大鼠雌激素硫酸转移酶(SULT1E1)ELISA试剂盒,英文名:SULT1E1 ELISA Kit
大鼠雌激素(E)ELISA试剂盒,英文名:E ELISA Kit
大鼠雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒,英文名:ER ELISA Kit
大鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒,英文名:E2 ELISA Kit
大鼠垂草扁桃酸(VMA)ELISA试剂盒,英文名:VMA ELISA Kit
大鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒,英文名:PF/PFP ELISA Kit