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新生霉素溶液 ,50mg/mL5mL
点击次数：117发布时间：2017/1/12 10:34:08
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：克隆及表达
优质供应
详细内容
新生霉素溶液 ,50mg/mL5mL运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需新生霉素溶液 ,50mg/mL5mL根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠钙调磷酸酶(CaN)elisa试剂盒，英文名：CaN ELISA Kit
大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(CaMKK)ELISA试剂盒，英文名：CaMKK ELISA Kit
大鼠钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒，英文名：CALU ELISA Kit
大鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒，英文名：CR ELISA Kit
大鼠钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA试剂盒，英文名：CAPN1 ELISA Kit
大鼠钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)ELISA试剂盒，英文名：iPLA2 ELISA Kit
大鼠钙/钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA试剂盒，英文名：CAMK 2 ELISA Kit
大鼠富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA试剂盒，英文名：LRG1 ELISA Kit
大鼠复制蛋白A 70kDaDNA结合亚基(RPA1)ELISA试剂盒，英文名：RPA1 ELISA Kit
大鼠复合前列腺特异性抗原(CPSA)ELISA试剂盒，英文名：CPSA ELISA Kit
大鼠封闭蛋白4(CLDN4)ELISA试剂盒，英文名：CLDN4 ELISA Kit
大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒，英文名：sIgA ELISA Kit
大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)ELISA试剂盒，英文名：sPLA2 ELISA Kit
大鼠肺炎病毒抗体(PV-Ab)ELISA试剂盒，英文名：PV-Ab ELISA Kit
大鼠肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒，英文名：SP-D ELISA Kit
大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒，英文名：SP-C ELISA Kit
大鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒，英文名：SP-B ELISA Kit
大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒，英文名：SP-A ELISA Kit
大鼠肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)ELISA试剂盒，英文名：TSLC1 ELISA Kit
大鼠肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒，英文名：MCT ELISA Kit
大鼠芳烃受体核转位因子样蛋白1(ARNTL)ELISA试剂盒，英文名：ARNTL ELISA Kit
大鼠泛素连接酶(E3/UBPL)ELISA试剂盒，英文名：E3/UBPL ELISA Kit
大鼠泛素结合酶(E2/UBCE)ELISA试剂盒，英文名：E2/UBCE ELISA Kit
大鼠泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA试剂盒，英文名：E1/UBAE ELISA Kit
大鼠泛素蛋白(Ub)ELISA试剂盒，英文名：Ub ELISA Kit
新生霉素溶液 ,50mg/mL5mL大鼠法尼醇X受体(FXR)ELISA试剂盒，英文名：FXR ELISA Kit
大鼠二酰基甘油(DAG/DG)ELISA试剂盒，英文名：DAG/DG ELISA Kit
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒，英文名：DPPⅣ ELISA Kit
大鼠二价金属离子转运体(DMT1)ELISA试剂盒，英文名：DMT1 ELISA Kit
大鼠二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)ELISA试剂盒，英文名：SLC/CCL21 ELISA Kit
大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒，英文名：DAO ELISA Kit
大鼠儿茶酚抑素(CST)ELISA试剂盒，英文名：CST ELISA Kit
大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒，英文名：CA ELISA Kit
大鼠多药耐药蛋白1(ABCB1)ELISA试剂盒，英文名：ABCB1 ELISA Kit
大鼠多肽YY/酪酪肽(PYY)ELISA试剂盒，英文名：PYY ELISA Kit
大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)ELISA试剂盒，英文名：DAT ELISA Kit
大鼠多巴胺D2受体配体(D2RL)ELISA试剂盒，英文名：D2RL ELISA Kit
大鼠多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒，英文名：D2R ELISA Kit
大鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒，英文名：D1R ELISA Kit
大鼠多巴胺(DA)ELISA试剂盒，英文名：DA ELISA Kit
大鼠对氧磷酶1(PON1)ELISA试剂盒，英文名：PON1 ELISA Kit
大鼠端粒酶(TE)ELISA试剂盒，英文名：TE ELISA Kit
大鼠毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒，英文名：M-AChR ELISA Kit
大鼠顶体蛋白(ACR)ELISA试剂盒，英文名：ACR ELISA Kit
大鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA试剂盒，英文名：AZT ELISA Kit
大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒，英文名：AIF ELISA Kit
大鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒，英文名：FASL ELISA Kit
大鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒，英文名：FAS/CD95 ELISA Kit
大鼠凋亡相关因子(FAS)ELISA试剂盒，英文名：FAS ELISA Kit
大鼠淀粉样前体蛋白(βAPP)ELISA试剂盒，英文名：βAPP ELISA Kit
大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒，英文名：FⅧAg ELISA Kit
大鼠抵抗素样α(Retnla)ELISA试剂盒，英文名：Retnla ELISA Kit
大鼠抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒，英文名：Resistin ELISA Ki
