产品展示
优质供应
详细内容
多粘菌素 B 硫酸盐5mL运输及保存:
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2. 用 5 倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积,下同)自备去离子水洗柱,共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱,进行平衡,使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清,将细胞沉淀(约100 mg)悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中,4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后,再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物:
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-c2)a) 超声破碎细胞,功率 30 W,保持细胞低温(0℃),直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需多粘菌素 B 硫酸盐5mL根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。)b) 为使溶液澄清,向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF(10mg/mL)。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟,以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱,收集上清样品,留样做 SDS-PAGE 电泳对照,其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白,直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-p2)a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞,沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清小心转移到新离心管中。
多粘菌素 B 硫酸盐5mL产品及特点:
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为 40kDa,由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高,易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒,它具有下列特点:
1. 一站式套装,含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱,操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质,其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱,无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8/Collagenase II)elisa试剂盒,英文名:MMP-8/Collagenase II ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒,英文名:MMP-8 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶8(MMP-8)ELISA试剂盒,英文名:MMP-8 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA试剂盒,英文名:MMP-7 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒,英文名:MMP-5 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒,英文名:MMP-4 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA试剂盒,英文名:MMP-3 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒,英文名:MMP-2/Gelatinase A ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶14(MMP-14)ELISA试剂盒,英文名:MMP-14 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒,英文名:MMP-13 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒,英文名:MMP-10 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1/Collagenase I)ELISA试剂盒,英文名:MMP-1/Collagenase I ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒,英文名:MMP-1 ELISA Kit
大鼠肌质网膜钙ATP酶(SERCA)ELISA试剂盒,英文名:SERCA ELISA Kit
大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)ELISA试剂盒,英文名:CK-MM ELISA Kit
大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA试剂盒,英文名:CK-MB ELISA Kit
大鼠肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)ELISA试剂盒,英文名:CK-BB ELISA Kit
大鼠肌生成抑制素(MSTN)ELISA试剂盒,英文名:MSTN ELISA Kit
大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA试剂盒,英文名:MYS ELISA Kit
大鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒,英文名:MYO/MB ELISA Kit
大鼠肌红蛋白(MB)ELISA试剂盒,英文名:MB ELISA Kit
大鼠肌酐(Cr)ELISA试剂盒,英文名:Cr ELISA Kit
大鼠肌钙蛋白T(Tn-T)ELISA试剂盒,英文名:Tn-T ELISA Kit
大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒,英文名:Tn-Ⅰ ELISA Kit
大鼠肌钙蛋白Ⅰ(CTnⅠ)ELISA试剂盒,英文名:CTnⅠ ELISA Kit
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒,英文名:GHRL ELISA Kit
大鼠活性氧调制因子1(ROMO1)ELISA试剂盒,英文名:ROMO1 ELISA Kit
多粘菌素 B 硫酸盐5mL大鼠活性氧(ROS)ELISA试剂盒,英文名:ROS ELISA Kit
大鼠活化素B(ACV-B)ELISA试剂盒,英文名:ACV-B ELISA Kit
大鼠活化素A受体抗体IgM(ACV-RAb IgM)ELISA试剂盒,英文名:ACV-RAb IgM ELISA Kit
大鼠活化素A受体抗体(ACV-RAb)ELISA试剂盒,英文名:ACV-RAb ELISA Kit
大鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒,英文名:ACV-A ELISA Kit
大鼠活化凝血因子X(FXa)ELISA试剂盒,英文名:FXa ELISA Kit
大鼠活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒,英文名:APC ELISA Kit
大鼠磺基转移酶(SULT1A1)ELISA试剂盒,英文名:SULT1A1 ELISA Kit
大鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒,英文名:LHRH ELISA Kit
大鼠黄体生成素(LH)ELISA试剂盒,英文名:LH ELISA Kit
大鼠黄嘌呤氧化酶(XOD)ELISA试剂盒,英文名:XOD ELISA Kit
大鼠环磷腺苷(cAMP)ELISA试剂盒,英文名:cAMP ELISA Kit
大鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒,英文名:cAMP ELISA Kit
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒,英文名:cGMP ELISA Kit
大鼠环加氧酶2(COX-2)ELISA试剂盒,英文名:COX-2 ELISA Kit
大鼠环加氧酶1(COX-1)ELISA试剂盒,英文名:COX-1 ELISA Kit
大鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒,英文名:CsA ELISA Kit
大鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA试剂盒,英文名:Alox5 ELISA Kit
大鼠花生四烯酸(AA)ELISA试剂盒,英文名:AA ELISA Kit
大鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒,英文名:EPOR ELISA Kit