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利福平溶液 ,100mg/mL10mL
点击次数：173发布时间：2017/1/12 10:36:15
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：克隆及表达
优质供应
详细内容
利福平溶液 ,100mg/mL10mL运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
利福平溶液 ,100mg/mL10mL5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
利福平溶液 ,100mg/mL10mL产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠紧密连接蛋白(Ocln)elisa试剂盒，英文名：Ocln ELISA Kit
大鼠金属转运蛋白1(MTP1)ELISA试剂盒，英文名：MTP1 ELISA Kit
大鼠金属硫蛋白2(MT-2)ELISA试剂盒，英文名：MT-2 ELISA Kit
大鼠金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒，英文名：MT ELISA Kit
大鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒，英文名：ADAM9 ELISA Kit
大鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒，英文名：ADAM8 ELISA Kit
大鼠解整合素样金属蛋白酶19(ADAM19)ELISA试剂盒，英文名：ADAM19 ELISA Kit
大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒，英文名：CNTF ELISA Kit
大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒，英文名：Hpt/HP ELISA Kit
大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒，英文名：CTGF ELISA Kit
大鼠结蛋白(Des)ELISA试剂盒，英文名：Des ELISA Kit
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒，英文名：Cav-1 ELISA Kit
大鼠角化细胞生长因子(KGF)ELISA试剂盒，英文名：KGF ELISA Kit
大鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒，英文名：AR ELISA Kit
大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒，英文名：GDNF ELISA Kit
大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒，英文名：GDNF ELISA Kit
大鼠胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒，英文名：Collagenase II ELISA Kit
大鼠胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒，英文名：Collagenase I ELISA Kit
大鼠胶原吡啶交联(PYD)ELISA试剂盒，英文名：PYD ELISA Kit
大鼠胶原C末端肽(CTX)ELISA试剂盒，英文名：CTX ELISA Kit
大鼠降钙素原(PCT)ELISA试剂盒，英文名：PCT ELISA Kit
大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒，英文名：CGRP ELISA Kit
大鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒，英文名：CT ELISA Kit
大鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒，英文名：ALP ELISA Kit
大鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒，英文名：bFGF-9 ELISA Kit
大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒，英文名：bFGF-6 ELISA Kit
大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒，英文名：bFGF-4 ELISA Kit
大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)ELISA试剂盒，英文名：bFGF ELISA Kit
大鼠甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒，英文名：TAb ELISA Kit
大鼠甲状腺素(T4)ELISA试剂盒，英文名：T4 ELISA Kit
大鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒，英文名：TG ELISA Kit
大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒，英文名：TPO ELISA Kit
大鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA试剂盒，英文名：PTHrP ELISA Kit
大鼠甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒，英文名：PTH ELISA Kit
利福平溶液 ,100mg/mL10mL大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒，英文名：AFP ELISA Kit
大鼠甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒，英文名：AFP ELISA Kit
大鼠甲羟戊酸5-焦磷酸脱羧酶(MDD)ELISA试剂盒，英文名：MDD ELISA Kit
大鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒，英文名：Methylase ELISA Kit
大鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒，英文名：HK ELISA Kit
大鼠极低密度脂蛋白(VLDL)ELISA试剂盒，英文名：VLDL ELISA Kit
大鼠激肽原(KNG)ELISA试剂盒，英文名：KNG ELISA Kit
大鼠激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)ELISA试剂盒，英文名：CKMB ELISA Kit
大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒，英文名：SDF-1β/CXCL12 ELISA Kit
大鼠基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)ELISA试剂盒，英文名：SDF-1α ELISA Kit
大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒，英文名：SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-4 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-3 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-2 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-1 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA试剂盒，英文名：MMP-9/Gelatinase B ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒，英文名：MMP-9 ELISA Kit
