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盐酸四环素干粉1g运输及保存:
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存,但介质需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定,其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2. 用 5 倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积,下同)自备去离子水洗柱,共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱,进行平衡,使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清,将细胞沉淀(约100 mg)悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中,4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后,再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物:
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-c2)a) 超声破碎细胞,功率 30 W,保持细胞低温(0℃),直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需盐酸四环素干粉1g根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。)b) 为使溶液澄清,向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF(10mg/mL)。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟,以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱,收集上清样品,留样做 SDS-PAGE 电泳对照,其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白,直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列(如 pMAL-p2)a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞,沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟,上清小心转移到新离心管中。
盐酸四环素干粉1g产品及特点:
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为 40kDa,由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高,易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒,它具有下列特点:
1. 一站式套装,含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱,操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质,其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱,无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠髓过氧化物酶(MPO)elisa试剂盒,英文名:MPO ELISA Kit
大鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA试剂盒,英文名:ACP ELISA Kit
大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒,英文名:aFGF-1 ELISA Kit
大鼠酸性成纤维细胞生长因子(aFGF/FGF-1)ELISA试剂盒,英文名:aFGF/FGF-1 ELISA Kit
大鼠酸性β葡萄糖苷酶(GBA)ELISA试剂盒,英文名:GBA ELISA Kit
大鼠松弛肽/松弛素1(RLN1)ELISA试剂盒,英文名:RLN1 ELISA Kit
大鼠松弛肽/松弛素(RLN)ELISA试剂盒,英文名:RLN ELISA Kit
大鼠丝裂原激活的蛋白激酶1/MAP激酶1(MAPK1)ELISA试剂盒,英文名:MAPK1 ELISA Kit
大鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(STK)ELISA试剂盒,英文名:STK ELISA Kit
大鼠水闸蛋白1(Cldn1)ELISA试剂盒,英文名:Cldn1 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒,英文名:AQP-5 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒,英文名:AQP-4 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒,英文名:AQP-3 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA试剂盒,英文名:AQP-2 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA试剂盒,英文名:AQP-1 ELISA Kit
大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒,英文名:AQP-0 ELISA Kit
大鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒,英文名:DHT ELISA Kit
大鼠瘦素(Leptin)ELISA试剂盒,英文名:Leptin ELISA Kit
大鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒,英文名:LEP ELISA Kit
大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒,英文名:ECP ELISA Kit
大鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)ELISA试剂盒,英文名:EPO ELISA Kit
大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒,英文名:ECF ELISA Kit
大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒,英文名:Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit
大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1)ELISA试剂盒,英文名:Eotaxin 1 ELISA Kit
大鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒,英文名:CyPA ELISA Kit
大鼠视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA试剂盒,英文名:RBP-4 ELISA Kit
大鼠视黄醇结合蛋白(RBP)ELISA试剂盒,英文名:RBP ELISA Kit
大鼠生长抑素(SS)ELISA试剂盒,英文名:SS ELISA Kit
大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒,英文名:GHRP-Ghrelin ELISA Kit
大鼠生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒,英文名:GHRP ELISA Kit
大鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒,英文名:GH ELISA Kit
大鼠生长分化因子15(GDF-15)ELISA试剂盒,英文名:GDF-15 ELISA Kit
大鼠生长分化因子15(GDF15)ELISA试剂盒,英文名:GDF15 ELISA Kit
盐酸四环素干粉1g大鼠肾肿瘤抗原(RAGE)ELISA试剂盒,英文名:RAGE ELISA Kit
大鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒,英文名:Kim-1 ELISA Kit
大鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒,英文名:Renin ELISA Kit
大鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒,英文名:ADM ELISA Kit
大鼠肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒,英文名:ADRA1A ELISA Kit
大鼠肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒,英文名:EPI ELISA Kit
大鼠肾病蛋白(nephrin)ELISA试剂盒,英文名:nephrin ELISA Kit
大鼠神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒,英文名:NT-4 ELISA Kit
大鼠神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒,英文名:NT-3 ELISA Kit
大鼠神经营养的酪氨酸激酶1型受体(NTRK1)ELISA试剂盒,英文名:NTRK1 ELISA Kit
大鼠神经型一氧化氮合成酶(nNOS/NOS1)ELISA试剂盒,英文名:nNOS/NOS1 ELISA Kit
大鼠神经型NO合酶(nNOS)ELISA试剂盒,英文名:nNOS ELISA Kit
大鼠神经调节蛋白2(NRG2)ELISA试剂盒,英文名:NRG2 ELISA Kit
大鼠神经调节蛋白1(NRG1)ELISA试剂盒,英文名:NRG1 ELISA Kit
大鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒,英文名:NSE ELISA Kit
大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒,英文名:NP-Y ELISA Kit
大鼠神经肽Y(NPY)ELISA试剂盒,英文名:NPY ELISA Kit
大鼠神经肽W(NP-W)ELISA试剂盒,英文名:NP-W ELISA Kit
大鼠神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒,英文名:NF ELISA Kit
大鼠神经生长因子前体(proNGF)ELISA试剂盒,英文名:proNGF ELISA Kit
大鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒,英文名:NGF ELISA Kit
大鼠神经颗粒素(NG/NRGN)ELISA试剂盒,英文名:NG/NRGN ELISA Kit
大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒,英文名:GFAP ELISA Kit