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Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL
点击次数：168发布时间：2017/1/12 12:38:32
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
Bradford 法蛋白定量试剂盒100mL特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
Phosphate Buffer, pH 7.2
缓冲氯化钠-蛋白胨溶液pH7.0缓冲液和溶液500mL*10
BUFFERED SOD CHLOR PEPTONE
液体硫乙醇酸盐培养基（FTM）无菌实验的厌氧菌和需氧菌培养100mL*25
NIH硫乙醇酸盐肉汤无菌实验的真菌和需氧菌培养500g
液体A（0.1%蛋白胨水）在USP中可用作FTM的替代品300mL*10
Fluid A
液体D（0.1%蛋白胨水和吐温80）无菌实验中用作冲洗/稀释液300mL*10
Fluid D
胰蛋白大豆肉汤无菌实验中用作冲洗/稀释液（样品含油和卵磷脂）100mL*25
Tryptic Soy Broth
蛋白胨具有很高的蛋白胨和氨基酸含量，非常适合细菌的生长500g
Bacto™ Peptone
脱脂奶粉用于制备微生物培养基。该类培养基一般用于保存和增殖乳酸菌500g
Skim Milk
LB肉汤，Lennox加富培养基，用于分子微生物研究中保存和培养重组菌株500g
LB Broth, Lennox
BactoTM琼脂*优化有益的钙镁离子比例同时减少有害离子含量454g
BactoTM Agar
平板计数琼脂高营养培养基，用于分离、计数异养或“富营养”的细菌，水、废水、食品、乳制品的细菌计数500g
Bradford 法蛋白定量试剂盒100mLPlate Count Agar
R2A琼脂低营养培养基，用于水检测中分离生长缓慢的“贫营养”的细菌和对营养要求较低的细菌500g
R2A Agar
m HPC琼脂高营养培养基，用于水检测中分离、计数异养或“富营养”的细菌500g
m-HPC Agar
D/E中和琼脂能中和抗微生物的化学试剂，用于环境标本中检测和计数表面微生物500g
D/E (Dey/Engley) Neutralizing Agar
D/E中和肉汤检测消毒剂和防腐剂的消毒与卫生效果500g
D/E (Dey/Engley) Neutralizing Broth
微生物含量测试琼脂（胰蛋白大豆琼脂含卵磷脂和吐温80）环境监测中的多种菌的计数500g
Microbial Content Test Agar(Trypticase™ Soy Agar with Lecithin ａnd Polysorbate 80)
营养肉汤非苛养要求微生物的普通培养500g
Nutrient Broth
营养琼脂培养多种微生物500g
Nutrient Agar
麦芽浸出液琼脂分离计数酵母和霉菌500g
Malt Extract Agar
Fluid Lactose Medium
Baird-Parker琼脂基础与卵黄亚碲酸盐增菌液合用，用于球菌选择性培养500g
Baird-Parker Agar Base
卵黄亚碲酸盐增菌液与Baird-Parker琼脂基础合用，用于球菌选择性培养100ML*6
EY Tellurite Enrichment
1%亚碲酸盐溶液用于球菌选择性培养时的添加剂20mL
Tellurite Solution
L-EMB琼脂（伊红美蓝琼脂）从乳糖非发酵的革兰氏阴性肠道杆菌中分离鉴别乳糖发酵的肠杆菌500g
Eosin Methylene Blue Agar, Levine
脑心浸液 500g
Brain Heart Infusion
50170蛋白胨生化试剂250 g检测微生物的培养基原材料，以动物骨肉组织为原材料水解而成
50171细菌学蛋白胨生化试剂400 g检测微生物的原材料，提供氮源
50160蛋白胨BR1㎏微生物发酵原材料，提供氮源
50161BR10㎏
50190胰蛋白胨BR400g酪蛋白胰酶水解而成的胨,培养基原材料
050190A（胰酪胨）BR10㎏
50192胰蛋白胨(进口)BR500g酪蛋白胰酶水解而成的胨,培养基原材料
50193BR10㎏
50210月示 蛋白胨BR400g检测细菌培养基，蛋白胨的一种水解物
50220大豆蛋白胨BR400g氮源、碳水化合物、维生素B1等
50260水解乳蛋白BR400g乳蛋白水解而成
50270酸水解酪蛋白胨BR400g酪蛋白酸水解而成的胨,培养基原材料
50240多价蛋白胨BR500g以带鱼为原材料水解而成的蛋白胨
酵母提取粉（膏）
50090酵母提取粉BR400g培养基原材料，含有丰富的B族维生素、氨基酸
50092BR10Kg
50093酵母提取粉(进口)BR500g培养基原材料，含有丰富的B族维生素、氨基酸
50094BR10Kg
50070酵母浸膏BR500g培养基原材料，含有丰富的B族维生素、氨基酸
50071BR5Kg
50072BR25Kg
牛肉浸粉（膏）
