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蛋白酶抑制剂混合液2×0.5mL
点击次数：129发布时间：2017/1/12 12:42:59
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
蛋白酶抑制剂混合液2×0.5mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
蛋白酶抑制剂混合液2×0.5mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
普通琼脂斜面培养基（pH8.0-8.2）250(g)
甘露醇氯化钠琼脂培养基250(g)
酪胨琼脂250(g)
葡萄糖蛋白胨培养基250(g)
抗生素检定培养基4号250(g)
抗生素检定培养基6号250(g)
抗生素检定培养基7号250(g)
抗生素检定培养基8号250(g)
抗生素检定培养基8号（AM8）250(g)
卵黄氯化钠琼脂培养基基础250(g)
抗生素检定培养基5号250(g)
抗生素检定培养基5号（AM5）250(g)
MUG培养基100(g)
真菌琼脂培养基250(g)
磷酸盐葡萄糖胨水培养基250(g)
蛋白酶抑制剂混合液2×0.5mL蛋白胨水培养基250(g)
改良马丁液体培养基250(g)
改良马丁琼脂培养基250(g)
胆盐乳糖发酵培养基250(g)
氯化钠-蛋白胨缓冲液（pH7.0）250(g)
检定用培养基250(g)
Candida Elective琼脂250(g)
DTM培养基基础250(g)
DRBC培养基250(g)
WORT琼脂基础250(g)
WORT肉汤基础250(g)
BIGGY琼脂250(g)
YGC琼脂250(g)
改良绿色酵母菌和真菌肉汤250(g)
Littman琼脂基础250(g)
DG-18琼脂基础250(g)
YM琼脂250(g)
YM11琼脂基础250(g)
OGY琼脂基础250(g)
WL营养琼脂250(g)
沙氏BHI琼脂250(g)
曲霉素琼脂(AFPA)250(g)
多粘菌素B培养基250(g)
MH肉汤（MHB）250(g)
MH琼脂（MHA）250(g)
中国蓝琼脂250(g)
克氏双糖铁琼脂（KIA）250(g)
血液琼脂基础250(g)
血液增菌培养基250(g)
氯化三苯四氮唑-沙保罗培养基250(g)
麦康凯琼脂250(g)
碱性琼脂平板250(g)
碱性胆盐琼脂250(g)
哥伦比亚血琼脂基础250(g)
哥伦比亚琼脂250(g)
豆粉琼脂250(g)
CLED培养基250(g)
显色培养基（ECA）1000mL/瓶
和大肠菌群液体显色培养基（LECC）1000mL/瓶
和大肠菌群显色培养基（ECCA）1000mL/瓶
大肠菌群显色培养基（CA）1000mL/瓶
沙门氏菌显色培养基（SA）1000mL/瓶
李斯特氏菌显色培养菌（LA）1000mL/瓶
O157显色培养基1000mL/瓶
阪崎肠杆菌显色培养基1000mL/瓶
阪崎肠杆菌显色培养基200g/瓶
弧菌显色培养基（VA）1000mL/瓶
球菌显色培养基500mL/瓶
球菌显色培养基1000mL/瓶
球菌显色培养基5000mL/瓶
mEI琼脂（肠球菌显色培养基）1000mL/瓶
ECC显色培养基A1000 mL/瓶
ECC显色培养基B25000mL/瓶
球菌显色培养基500 mL/瓶
