产品展示
APMSF 溶液，10mg/mL1mL
点击次数：101发布时间：2017/1/12 12:50:58
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
APMSF 溶液，10mg/mL1mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
APMSF 溶液，10mg/mL1mL一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取APMSF 溶液，10mg/mL1mL一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
12176Thayer-Martin 选择性琼脂基础（MTMⅡ琼脂基础）250g/瓶用于致病性奈瑟氏菌的分离
22119IsoVitaleX 添加剂1ml×10 支/盒每支用于 100ml Thayer-Martin 选 择 性 琼 脂 基 础 用 于 制 备 Thayer-Martin 选择性琼脂或 MTM Ⅱ琼脂
22120V-C-N 抑菌剂1ml×10 支/盒
22121三甲氧苄胺嘧啶乳酸盐Trimethoprim Lactate0.5mg×10 支/盒每支用于 100ml MTMⅡ琼脂基础 用于制备 MTMⅡ琼脂
10706Mueller-Hinton 琼脂250g/瓶用于细菌药敏试验
11816MH 肉汤250g/瓶用于稀释法进行药敏试验
11820四环素族检定培养基250g/瓶用于四环素族抗生素残留检测
11216AK 琼脂 2 号250g/瓶用于检测牛奶和乳制品中抗生素残 留时孢子液制备
12164HTM 培养基250g/瓶用于副嗜血杆菌纸片扩散法药敏试 验，每升培养基中需添加 15mg 无 菌 NAD
10134溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基250g/瓶用于鲜乳中抗生素残留检验
10266LB 琼脂LB 250g/瓶含 0.5%NaCl，用于分子生物学中大 肠杆菌的培养
10267NZCYM 肉汤250g/瓶用于菌株培养，配方被推 荐用于重组l的复制
10268NZYM 肉汤250g/瓶不含酸水解酪蛋白，用于 菌株培养，配方被推荐用于重组l 的复制
10269Luria 肉汤基础250g/瓶含 0.05%NaCl，用于的培 养和保存，视需要每 1L 培养基中无 菌添加 10ml20%葡萄糖溶液
10270Luria 琼脂基础250g/瓶含 0.05%NaCl，用于的培 养和保存，视需要每 1L 培养基中无 菌添加 10ml20%葡萄糖溶液
102712×YT 培养基250g/瓶用于重组菌株的培养
10272M9 低盐培养基250g/瓶用于制备 M9 低盐培养基，培养重 组菌株
APMSF 溶液，10mg/mL1mL10274麦康凯琼脂基础250g/瓶不含碳水化合物，用于的 发酵研究
10275低限肉汤（不含葡萄糖）250g/瓶用于分离和表现营养突变型大肠杆 菌和枯草芽孢杆菌的特性
10276低限琼脂250g/瓶用于分离和表现营养突变型大肠杆 菌的特性
10277SOC 培养基250g/瓶用于基因工程的培养
10278SOB 培养基250g/瓶用于分子遗传学菌株的培 养
10279极品肉汤Terrific250g/瓶用于培养
10280选择性 APS 肉汤基础250g/瓶非动物源配方，用于分子生物学试 验中的保存和培养
10281选择性 APS 超级肉汤基础250g/瓶非动物源配方，用于培养重组大肠 杆菌菌株，提高质粒产量
11148YPD 琼脂250g/瓶用于分子生物学实验中酵母菌的培 养和保存
11149YPD 肉汤250g/瓶用于分子生物学实验中酵母菌的培 养和保存
12111K 氏培养基250g/瓶用于饮料中耐热耐酸菌的检测，需 使用苹果酸调节 pH
10710肝浸液培养基250g/瓶用于菌属分离
10711胰蛋白胨琼脂培养基250g/瓶用于菌属检验
12103阿须贝氏（Ashby）培养基250g/瓶用于固氮菌的培养
12105根瘤菌培养基250g/瓶用于根瘤菌的保藏和培养
12106硅酸盐细菌培养基250g/瓶用于硅酸盐细菌的培养
12107固氮（茎瘤）根瘤菌培养基250g/瓶用于（茎瘤）根瘤菌培养
12109联合固氮菌培养基250g/瓶用于固氮螺菌的培养
12110光合细菌培养基250g/瓶用于光合细菌的培养
12144胱氨酸乳糖无电解质培养基250g/瓶无抑制性，用于泌尿系统致病菌的分离和培养，也可做深部培养的贮 运
12145包姜氏琼脂培养基250g/瓶用于百日咳杆菌的分离，需添加 1%甘油和 15%脱纤维羊血 50701
12147纤维素分解菌培养基250g/瓶用于纤维素分解菌的分离和鉴别， 纤维素分解菌周围有红色分解圈
12159脑膜炎奈瑟氏菌糖发酵琼脂基础250g/瓶用于脑膜炎奈瑟氏菌糖发酵试验
12161幽门螺杆菌琼脂培养基250g/瓶用于幽门螺杆菌的分离培养，需添 加抗生素及马血
12401碎肉培养基250g/瓶用于痤疮丙酸杆菌的培养，不含维 生素 K，需添加 11002（庖肉牛肉 粒）
11943黄原胶液体发酵培养基1 万 ml/包以葡萄糖为碳源，用于黄原胶生产
12501Tinsdale 琼脂基础250g/瓶用 于 白 喉 杆 菌 的 分 离 培 养 ， 每100ml 培养基中需添加 10ml 血清 以及 1 支 22501
22501Tinsdale 琼脂基础添加剂5ml×10 支/盒每支用于 100ml12501 中
12502亚碲酸钾血琼脂基础250g/瓶用于白喉杆菌的分离培养，需添加 亚碲酸钾及羊血
12309吡哆醇 Y 培养基100g/瓶用于吡哆醇测定
12601Korthof 培养基250g/瓶用于钩端螺旋体的增菌培养，每 100ml 培养基中需添加兔（羊、或 马）血清 8ml
12610EMJH 培养基250g/瓶用于钩端螺旋体的增菌培养，每 90ml 培养基中添加 1 支 22601
12173发根农杆菌培养基250g/瓶
显色培养基1000ml用于快速、准确检测培养24小时，显兰色
大肠菌群显色培养基1000ml用于快速、准确检测大肠菌群大肠菌群培养24小时，显兰色
／大肠菌群显色培养基1000ml用于快速、准确同时检测和大肠菌群，培养24小时，显紫色,大肠菌群显红色
TBX 培养基1000ml用于快速、准确检测培养24小时，显兰色
细菌总数显色培养基250用于快速、准确检测细菌总数，培养24小时，细菌显红色
