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E-64 蛋白酶抑制剂，20mg/mL10mL
点击次数：171发布时间：2017/1/12 12:55:32
更新日期：2022/8/17 11:57:28
所 在 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
E-64 蛋白酶抑制剂，20mg/mL10mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
E-64 蛋白酶抑制剂，20mg/mL10mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
10107胰酪胨大豆肉汤培养基250g/瓶用于细菌培养及抑菌剂效力检查
10108胰酪胨大豆琼脂培养基250g/瓶用于细菌培养及抑菌剂效力检查
10155TGC 培养基250g/瓶用于无菌检验（日本）
10813普通肉汤培养基250g/瓶用于球菌的增菌，也可用 于其它细菌的增菌（SN）
11836细菌保存培养基250g/瓶用于菌种培养与保存，可制备菌种保 存斜面（pH7.3）
11704SCDLP 液体培养基250g/瓶用于化妆品样品的增菌，每升培养基 中需添加 1 支 20107
11209菌种培养基250g/瓶用于菌种培养与保存，可制备菌种保 存斜面（pH6.5）
10158Letheen 琼脂基础250g/瓶用于化妆品卫生微生物检测，每升培 养基中需添加 1 支 20107
10159Letheen 肉汤基础250g/瓶用于化妆品卫生微生物检测，每升培养基中需添加 1 支 20204
10160改良 Letheen 琼脂基础250g/瓶用于化妆品卫生微生物检测（ISO）， 每升培养基中需添加 1 支 20107
10161改良 Letheen 肉汤基础250g/瓶用于化妆品卫生微生物检测（ISO）， 每升培养基中需添加 1 支 20204
10162血琼脂基础 2 号250g/瓶用于细菌的培养、分离和鉴别需添加5-10%脱纤维羊血
10163血液增菌培养基250g/瓶用于血液中致病菌的分离
10170Eugon 肉汤250g/瓶广泛用于微生物的培养
10171Eugon 琼脂250g/瓶广泛用于微生物的培养
10172胰蛋白示磷酸盐肉汤250g/瓶用于苛养菌的增菌和培养
12703小牛浸液肉汤250g/瓶用于苛养菌的培养
12704小牛浸液琼脂250g/瓶用于苛养菌的培养
E-64 蛋白酶抑制剂，20mg/mL10mL11708明胶培养基250g/瓶用于细菌的明胶生化试验
10807甘露醇发酵培养基250g/瓶用于甘露醇发酵试验
10140甘露醇培养基250g/瓶用于甘露醇发酵试验
10146醋酸铅培养基250g/瓶用于细菌产硫化氢试验，每 100ml培养基中添加 1 支 20104
10147溴甲酚紫琼脂基础（糖发酵基础）250g/瓶选择性添加 0.5-1%碳源，用于细菌 的分离和鉴别
10148溴甲酚紫肉汤基础250g/瓶选择性添加 0.5-1%碳源，用于细菌 的分离和鉴别
10156糖发酵培养基250g/瓶溴麝香草酚蓝为指示剂，不含碳源， 用于糖发酵试验（GB、药典）
10157淀粉培养基250g/瓶用于细菌淀粉水解试验
10410葡萄糖半固体琼脂250g/瓶用于葡萄糖利用（产酸、产气）实 验
11050石蕊牛乳培养基250g/瓶用于测定细菌对牛乳的发酵
10179丙二酸钠培养基250g/瓶用于细菌生化鉴定
10180蛋白胨水培养基250g/瓶用于细菌靛基质试验
10346精氨酸双水解酶试验培养基250g/瓶用于细菌的精氨酸双水解酶试验
10199鸟氨酸脱羧酶试验培养基250g/瓶用于细菌的鸟氨酸脱羧酶试验
10100氨基酸脱羧酶试验对照培养基250g/瓶用于细菌的氨基酸试验对照
12701缓冲葡萄糖蛋白胨水培养基250g/瓶用于细菌的 MR、VP 试验
10103营养琼脂（NA）250g/瓶用于菌落总数测定、菌种纯化和传 代
10101平板计数琼脂（PCA）250g/瓶用于细菌总数测定
10112R2A 琼脂250g/瓶用于水中菌落总数测定
10115TTC 营养琼脂250g/瓶用于细菌总数测定
11502胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）250g/瓶用于细菌总数测定、纯化、培养
10104卵磷脂-吐温 80 营养琼脂培养基250g/瓶用于化妆品菌落总数测定，每升培 养基中添加 1 支 20107
10119胰化大豆坚固绿琼脂（TSFA）250g/瓶用于滤膜法细菌总数测定
10120改良平板计数琼脂（MPCA）250g/瓶用于乳及乳制品中菌落总数、嗜冷 菌、需氧芽孢菌的测定
101232216E 琼脂250g/瓶用于海生细菌的计数和培养
10130酵母粉琼脂250g/瓶用于水中细菌总数的测定（ISO）
10141CVT 琼脂培养基250g/瓶用于乳及 乳制品中 嗜低温 细 菌总 数的测定
10142嗜冷菌计数琼脂250g/瓶用于乳及 乳制品中 嗜冷菌 菌 落总 数的测定（ISO）
10164SCDLP 琼脂基础250g/瓶用于化妆品中细菌总数的 测定 （ISO），每升培养基中需添加 1支 20107
10167Eugon LT 100 肉汤基础250g/瓶用于化妆品中细菌总数的 测定 （ISO），每升培养基中需添加 1支 20204（吐温 80）
10168Eugon LT 100 琼脂培养基250g/瓶用于化妆品中细菌总数的 测定 （ISO），每升培养基中需添加 1支 20204（吐温 80）
10169LT 100 琼脂基础250g/瓶用于化妆品中细菌总数的 测定 （ISO），每升培养基中需添加 1支 20204（吐温 80）
12702含卵磷脂的胰酪胨大豆琼脂250g/瓶用于细菌检测和菌落总数的测定
10202煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤250g/瓶用于大肠菌群测定
10203结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）250g/瓶用于大肠菌群平板计数
10212EC 肉汤250g/瓶用于、粪大肠菌群测定
10236去氧胆酸盐琼脂（DC）250g/瓶用于大肠菌群平板计数
10224胆盐乳糖培养基250g/瓶用于大肠菌群的测定
10205乳糖胆盐发酵培养基250g/瓶用于大肠菌群测定
10223双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基250g/瓶用于化妆品粪大肠菌群检验，每升 添加 2 支 20107
